ଜିଆର୍ଡିଆ ଡୁଏଡେନମ୍ ହେଉଛି ଏକ ପରଜୀବୀ ଜୀବ ଯାହାକି ଜିଆରଡିଆସିସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରେ, ଅନ୍ତ est ନଳୀ ସଂକ୍ରମଣ ବିଶେଷତ young ଛୋଟ ପିଲାମାନଙ୍କଠାରେ hea ାଡ଼ା ରୋଗର ଲକ୍ଷଣ ଦେଖାଯାଏ |ଆମେ ପୂର୍ବରୁ ରିପୋର୍ଟ କରିଛୁ ଯେ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ଇଣ୍ଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ଅଲିଗୋମେରାଇଜେସନ୍ ପରି ରିସେପ୍ଟର ((NLRP3) ବାନ୍ଧୁଥିବା ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ସକୁ ସକ୍ରିୟ କରିଥାଏ ଏବଂ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ଭେସିକଲ୍ (ଇଭି) ସିକ୍ରେସନ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ହୋଷ୍ଟ ପ୍ରଦାହଜନକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିଥାଏ |ଅବଶ୍ୟ, ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଜଡିତ ପାଥୋଜେନ-ଜଡିତ ଡୁଏଡେନୋକୋକାଲ୍ ଇଭି (GEV) ର ସଠିକ୍ ମଲିକୁଲାର୍ s ାଞ୍ଚା ଏବଂ ଜିଆର୍ଡିଆସିସରେ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମର ଭୂମିକା ବର୍ଣ୍ଣିତ ହୋଇ ରହିଛି |
ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଇଉକାରିଓଟିକ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ପ୍ଲାସିମିଡ୍ pcDNA3.1 (+) - GEV ରେ ଆଲଫା -2 ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡିନଗୁଡିକ ନିର୍ମାଣ କରାଯାଇଥିଲା, ମାଉସ୍ ପ୍ରାଥମିକ ପେରିଟୋନିଆଲ୍ ମାକ୍ରୋଫେଜ୍ରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ପ୍ରଦାହ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକ କାସପେଜ୍ -1 ମାପ କରି ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା |P20 ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତର ସ୍କ୍ରିନ କରାଯାଇଥିଲା |।ଜି।1β ସ୍ତର, ଆପୋପ୍ଟୋଟିକ୍ ସ୍ପଟଡ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ (ASC) ଅଲିଗୋମେରାଇଜେସନ୍ ସ୍ତର, ଏବଂ NLRP3 ଏବଂ ASC ର ଇମ୍ୟୁନୋଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଲୋକାଲାଇଜେସନ୍ |ଜି।ଏଥିସହ, ଆମେ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଛୁ ଯେ ହାଇଆର୍ଡାଇନ୍ସ ଆଲଫା-୨ ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ମାଧ୍ୟମରେ ଭିଭୋରେ IL-1β ସିକ୍ରେଟ ସୃଷ୍ଟି କରେ ଏବଂ ମୂଷାମାନଙ୍କରେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସର ରୋଗରେ ଏହି ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ଭୂମିକା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିଥିଲୁ |
ଆଲଫା-୨ ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ସ ଭିଟ୍ରୋରେ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମର ସକ୍ରିୟତାକୁ ପ୍ରବର୍ତ୍ତାଏ |ଏହା ଦ୍ p ାରା p20 କାସପେଜ୍ -1 ସକ୍ରିୟ ହେବା, NLRP3, ପ୍ରୋ- IL-1β ଏବଂ ପ୍ରୋ-କାସପେଜ୍ -1 ପ୍ରୋଟିନ୍ ର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତର ବୃଦ୍ଧି, IL-1β ଗୁପ୍ତରେ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ବୃଦ୍ଧି, ASA ଦାଗ ଗଠନ | ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମ୍, ଏବଂ ASA ଅଲିଗୋମେରାଇଜେସନ୍ ର ଆବେଦନ |NLRP3 ପ୍ରଦାହ ପେନିଲ୍ କ୍ଷତି ମୂଷାମାନଙ୍କରେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସର ରୋଗ ଜନିତ ରୋଗକୁ ବ .ାଇଥାଏ |NLRP3- ଅବରୋଧିତ ମୂଷାମାନଙ୍କ ଦ୍ ga ାରା ଗାଭେଜ୍ ଦ୍ cy ାରା ସିଷ୍ଟସ୍ ସହିତ ଚିକିତ୍ସିତ ମୂଷାମାନେ ବହୁ ସଂଖ୍ୟାରେ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲେ ଏବଂ ଡୁଏଡେନାଲ୍ ଭିଲିରେ ଗୁରୁତର କ୍ଷତି ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲେ, ଯାହା ସଙ୍କୋଚିତ ଏବଂ ଶାଖା ସହିତ ନେକ୍ରୋଟିକ୍ କ୍ରିପ୍ଟ ଦ୍ୱାରା ବର୍ଣ୍ଣିତ |ଭିଭୋ ପରୀକ୍ଷଣରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି ଯେ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ସ ଆଲଫା-୨ ଏବଂ ଆଲଫା -3..3 NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ମାଧ୍ୟମରେ IL-1β ର ଗୁପ୍ତତା ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ ଏବଂ ଗିଆର୍ଡାଇନ୍ସ ଆଲଫା-୨ ଏବଂ ଆଲଫା -3। With ସହିତ ପ୍ରତିରୋପଣ ମୂଷାମାନଙ୍କରେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସର ରୋଗ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ।
ଏକାଠି ନିଆଗଲା, ଏହି ଅଧ୍ୟୟନର ଫଳାଫଳରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଜିଆରିଆ ଆଲଫା-୨ ଏବଂ ଆଲଫା -3। Host ହୋଷ୍ଟ NLRP3 ପ୍ରଦାହର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିଥାଏ ଏବଂ ମୂଷାମାନଙ୍କରେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସର ସଂକ୍ରମଣକୁ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ, ଯାହା ଜିଆର୍ଡିଆସିସ୍ ରୋକିବା ପାଇଁ ଲକ୍ଷ୍ୟ ରଖିଥାଏ |
ଜିଆର୍ଡିଆ ଡୁଏଡେନମ୍ ହେଉଛି ଏକ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ପ୍ରୋଟୋଜୋନ୍ ପରଜାଇଟ୍ ଯାହା କ୍ଷୁଦ୍ର ଅନ୍ତନଳୀରେ ବାସ କରେ ଏବଂ ବାର୍ଷିକ 280 ନିୟୁତ arr ାଡ଼ା ରୋଗରେ ଆକ୍ରାନ୍ତ ହୁଏ, ବିଶେଷକରି ବିକାଶଶୀଳ ଦେଶର ଛୋଟ ପିଲାମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ [1] |ଲୋକମାନେ ପାନୀୟ ଜଳ କିମ୍ବା M. duodenum cysts ଦ୍ୱାରା ଦୂଷିତ ଖାଦ୍ୟ ଦ୍ infected ାରା ସଂକ୍ରମିତ ହୁଅନ୍ତି, ଯାହା ପରେ ପେଟରେ ପ୍ରବେଶ କରେ ଏବଂ ଗ୍ୟାଷ୍ଟ୍ରିକ୍ ରସରେ ନିର୍ଗତ ହୁଏ |ଜିଆର୍ଡିଆ ଡୁଏଡେନମ୍ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ସ ଡୁଏଡେନାଲ୍ ଏପିଥେଲିୟମ୍ ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ ହୋଇ ବାନ୍ତି, ବାନ୍ତି, arr ାଡ଼ା, ପେଟ ଯନ୍ତ୍ରଣା ଏବଂ ଓଜନ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ |ଇମ୍ୟୁନୋଡେଫିସିଏନ୍ସି ଏବଂ ସିଷ୍ଟିକ୍ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ଥିବା ବ୍ୟକ୍ତିମାନେ ସଂକ୍ରମିତ ହୋଇପାରନ୍ତି |ମ oral ଖିକ ଏବଂ ଆନାଲ୍ ସେକ୍ସ ମାଧ୍ୟମରେ ସଂକ୍ରମଣ ମଧ୍ୟ ହୋଇପାରେ |ମେଟ୍ରୋନିଡାଜୋଲ, ଟିନିଡାଜୋଲ, ଏବଂ ନିଟାଜୋକ୍ସାନାଇଡ୍ ଭଳି ug ଷଧଗୁଡିକ ଡୁଏଡେନାଲ୍ ସଂକ୍ରମଣ ପାଇଁ ପସନ୍ଦଯୋଗ୍ୟ ଚିକିତ୍ସା ବିକଳ୍ପ ଅଟେ |ଅବଶ୍ୟ, ଏହି କେମୋଥେରାପି drugs ଷଧଗୁଡ଼ିକ ବାନ୍ତି, କର୍କିନୋଜେନେସିସ୍ ଏବଂ ଜେନୋଟକ୍ସାଇସିଟି ଭଳି ପ୍ରତିକୂଳ ପାର୍ଶ୍ୱ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ |ତେଣୁ, ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସଂକ୍ରମଣକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ଅଧିକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ରଣନୀତି ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯିବା ଆବଶ୍ୟକ |
ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ହେଉଛି ସାଇଟୋସୋଲିକ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସର ଏକ ଶ୍ରେଣୀ ଯାହା ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଏକ ଅଂଶ, ପାଥୋଜେନ ଆକ୍ରମଣରୁ ରକ୍ଷା କରିବାରେ ଏବଂ ପ୍ରଦାହଜନକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ମଧ୍ୟସ୍ଥି ହେବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ |ଏହି ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମଗୁଡିକ ମଧ୍ୟରେ, ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍-ବାଇଣ୍ଡିଂ ଅଲିଗୋମେରାଇଜେସନ୍ (NOD) ରିସେପ୍ଟର 3 (NLRP3) ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍-ବାଇଣ୍ଡିଂ ଅଲିଗୋମେରାଇଜେସନ୍ (NLRP3) ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍-ବାଇଣ୍ଡିଂ ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇଛି କାରଣ ଏହା ବିଭିନ୍ନ ପାଥୋଜେନ / କ୍ଷତି ସହ ଜଡିତ ମଲିକୁଲାର s ାଞ୍ଚା (PAMP /) ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇପାରେ | DAMP), ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରଣାଳୀକୁ ଚିହ୍ନିଥାଏ, ସକ୍ରିୟ କରିଥାଏ |ଏବଂ ଅନେକ ପ୍ରଦାହଜନକ ରୋଗରେ ଅନ୍ତନଳୀ ହୋମୋଷ୍ଟାସିସ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ [6,7,8] |ଏଥିରେ ପ୍ୟାଟର୍ ସ୍ୱୀକୃତି ରିସେପ୍ଟର (PRR) NLRP3, ଏକ ଆଡାପ୍ଟର ଆପୋପଟୋଟିକ୍ ସ୍ପଟଡ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ (ASC), ଏବଂ ଏକ ଇଫେକ୍ଟର ପ୍ରୋସ୍କାସପେଜ୍ -1 କିମ୍ବା ପ୍ରୋକାସପେଜ୍ -11 ରହିଥାଏ |NLRP3 ଇନଫ୍ଲାମାସୋମ ପାଥୋଜେନ ଆକ୍ରମଣ ବିରୁଦ୍ଧରେ ଏକ ହୋଷ୍ଟ ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରିଥାଏ, ଯେପରି ନେଓସପୋରା କଏନମ୍ [9], ପାରାକୋସିଡିଓଏଡସ୍ ବ୍ରାସିଲିଏନ୍ସିସ୍ [10] ଏବଂ ଲିଶମାନିଆ ଅଧ୍ୟୟନରେ ଦେଖାଯାଇଥିଲା |]ଆମର ପୂର୍ବ ଅନୁସନ୍ଧାନ ଉପରେ ଆଧାର କରି, ଆମେ ରିପୋର୍ଟ କରିଛୁ ଯେ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ NLRP3 ପ୍ରଦାହର ଇଣ୍ଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ଆକ୍ଟିଭେସନ୍ ଟ୍ରିଗର୍ କରିଥାଏ ଏବଂ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ଭେସିକଲ୍ (ଇଭିଏସ୍) ଗୁପ୍ତ କରି ହୋଷ୍ଟ ପ୍ରଦାହଜନକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଗୁଡ଼ିକୁ ମୋଡ୍ୟୁଲେଟ୍ କରିଥାଏ |ଅବଶ୍ୟ, ଭିଭୋରେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସଂକ୍ରମଣରେ NLRP3 ଇନଫ୍ଲାମାସୋମ୍ର ଭୂମିକା ସ୍ଥିର ହୋଇ ରହିଛି |
ଜିଆର୍ଡିନଗୁଡିକ ମୂଳତ G. ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟନର ଗଠନମୂଳକ ଉପାଦାନ ଭାବରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ ମୋଟିଲିଟି ଏବଂ କ୍ଷୁଦ୍ର ଅନ୍ତନଳୀରେ ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କୋଷ ସଂଲଗ୍ନରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରିଥାଏ |ପରିବେଶ ସହିତ ଭଲ ଭାବରେ ଖାପ ଖୁଆଇବା ଏବଂ ସେମାନଙ୍କ ରୋଗ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ, ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ସ 8 ଟି ଫ୍ଲାଗେଲା, 1 ମଧ୍ୟମ ଶରୀର ଏବଂ 1 ଭେଣ୍ଟ୍ରାଲ୍ ଡିସ୍କକୁ ନେଇ ଏକ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟାଲ୍ ଗଠନ କରିଥିଲେ |ଜିଆର୍ଡିଆ ଡୁଏଡେନମ୍ ର ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ସ ସେମାନଙ୍କର ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଉପର କ୍ଷୁଦ୍ର ଅନ୍ତନଳୀରେ ପ୍ରବେଶ କରି ବିଶେଷ ଭାବରେ ଡୁଏଡେନମ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି ଏବଂ ଏଣ୍ଟେରୋସାଇଟ୍ ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ କରନ୍ତି |ସେମାନେ କ୍ରମାଗତ ଭାବରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହୁଅନ୍ତି ଏବଂ କୋଷ ମେଟାବୋଲିଜିମ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଏପିଥେଲିଆଲ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ ହୁଅନ୍ତି |ତେଣୁ, ସେମାନଙ୍କର ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟନ୍ ଏବଂ କୁମାରୀ ମଧ୍ୟରେ ଏକ ଘନିଷ୍ଠ ସମ୍ପର୍କ ଅଛି |ଜିଆର୍ଡିଆ ଡୁଏଡେନମ୍ ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ସ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟନ୍ ଗଠନର ଉପାଦାନ ଏବଂ ଏହାକୁ ଚାରୋଟି ଶ୍ରେଣୀରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇଛି: α-, β-, γ-, ଏବଂ δ- ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ସ |Α- ଗିଆର୍ଡିନ ପରିବାରର 21 ଜଣ ସଦସ୍ୟ ଅଛନ୍ତି, ଯାହାର ସମସ୍ତଙ୍କର ଫସଫୋଲିପିଡ୍ସ ବାନ୍ଧିବା ପାଇଁ କ୍ୟାଲସିୟମ ନିର୍ଭରଶୀଳ କ୍ଷମତା ଅଛି |ସେମାନେ ସାଇଟୋସ୍କେଲେଟନ୍ କୁ ସେଲ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ସହିତ ମଧ୍ୟ ସଂଯୋଗ କରନ୍ତି |ଜି।ଜିଆର୍ଡିଆ ଆଲଫା -1 ଉପରେ ଆଧାରିତ ହେଟେରୋଲୋଜିକ୍ ଟିକା ମୂଷାମାନଙ୍କରେ ଜିଆର୍ଡିଆସିସ୍ ରୋଗରୁ ରକ୍ଷା ପାଇଥାଏ ଏବଂ ଟିକା ବିକାଶ ପାଇଁ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରାର୍ଥୀ ଆଣ୍ଟିଜେନ୍ ଅଟେ |ଆଲଫା -8 ଗିଆର୍ଡିନ, ପ୍ଲାଜମା ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ଏବଂ ଫ୍ଲାଗେଲାରେ ସ୍ଥାନିତ, କିନ୍ତୁ ଭେଣ୍ଟ୍ରାଲ୍ ଡିସ୍କରେ ନୁହେଁ, ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସରେ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ସର ଗତି ଏବଂ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ହାରକୁ ବ ances ାଇଥାଏ |ଆଲଫା -14 ଜିଆର୍ଡିନ୍ ଫ୍ଲାଗେଲା ଉପରେ ମାଇକ୍ରୋଟ୍ୟୁବୁଲ୍ ସଂରଚନା ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ ହୁଏ ଏବଂ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ |ଆଲଫା -11 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଜୀବନଚକ୍ରରେ ପ୍ରଚୁର ପରିମାଣରେ ଉପସ୍ଥିତ, ଏବଂ ଆଲଫା -11 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ର ଅତ୍ୟଧିକ ସଙ୍କୋଚନ ଜି ​​ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ନିଜେ କ୍ଷତି ପହଞ୍ଚାଏ |ଅବଶ୍ୟ, ଆଲଫା-୨ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସଂକ୍ରମଣ ଏବଂ ଏହାର ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ଯନ୍ତ୍ରକ against ଶଳରୁ ରକ୍ଷାକାରୀ କି ନାହିଁ ତାହା ଅସ୍ପଷ୍ଟ ରହିଛି।
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଇଉକାରିଓଟିକ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ପ୍ଲାସିମିଡ୍ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ହୋଷ୍ଟ NLRP3 କୁ ସକ୍ରିୟ କରିବା ପାଇଁ ମାଉସ୍ ପ୍ରାଥମିକ ପେରିଟୋନିଆଲ୍ ମାକ୍ରୋଫେଜରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହୋଇଥିଲା |ପରେ ଇନଫ୍ଲାମାସୋମ ଟାର୍ଗେଟଗୁଡିକ ସ୍କ୍ରିନ କରାଯାଇଥିଲା |ଜି। G. duodenalisଆମର ସାଧାରଣ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଥିଲା ଜି ଡୁଡୋଡେନାଲିସ୍ ସଂକ୍ରମଣ ରୋକିବା ପାଇଁ ପ୍ରତିଜ୍ଞାକାରୀ ଲକ୍ଷ୍ୟ ବିକାଶ କରିବା |
ୱାଇଲ୍ଡ ପ୍ରକାର (WT) C57BL / 6 ମହିଳା ମୂଷା 5-8 ସପ୍ତାହ ବୟସରେ ଲିଆଓନିଂ ଚାଙ୍ଗସେଙ୍ଗ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରାଣୀ କେନ୍ଦ୍ର (ଲିଆଓନିଂ, ଚୀନ୍) ରୁ କ୍ରୟ କରାଯାଇଥିଲା |ମୂଷାମାନେ ଜଳକୁ ମାଗଣା ପ୍ରବେଶ କରିଥିଲେ, ନିର୍ଜଳ ଖାଦ୍ୟ ଗ୍ରହଣ କରିଥିଲେ ଏବଂ 12/12 ଘଣ୍ଟା ଆଲୋକ / ଅନ୍ଧକାର ଚକ୍ରରେ ରଖାଯାଇଥିଲା |ସଂକ୍ରମଣ ପୂର୍ବରୁ ମୂଷାମାନେ ଆମ୍ପିସିଲିନ୍ (mg ୦ ମିଗ୍ରା / ମି.ଏଲ୍), ଭାନକୋମାଇସିନ୍ (mg ୦ ମିଗ୍ରା / ମି.ଏଲ୍) ଏବଂ ନେଓମାଇସିନ୍ (mg। Mg ମିଗ୍ରା / ମି.ଏଲ୍) ସହିତ ପାନୀୟ ଜଳରେ ଆଣ୍ଟିବାୟୋଟିକ୍ ଆଡ୍ ଲିବିଟମ୍ ଗ୍ରହଣ କରିଥିଲେ (ଚାଇନାର ସାଂଘାଇ, କୃତ୍ରିମ ଜୀବ) ]।]।ମୂଷାମାନେ 24 ଘଣ୍ଟା ଧରି ଖାଇବା ପିଇବାର କ୍ଷମତା ହରାଇଲେ ଏବଂ ଶରୀରର ଓଜନ ≥ 20% ହ୍ରାସ କଲେ ଗର୍ଭାଶୟ ସ୍ଥାନାନ୍ତର ଦ୍ୱାରା ମାନବୀୟ ଭାବରେ ଇଉଥାନାଇଜ୍ ହେଲା |
ଡବ୍ଲୁବି ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ସ (ଆମେରିକୀୟ ପ୍ରକାର ସଂସ୍କୃତି ସଂଗ୍ରହ, ମାନାସା, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) 12.5% ​​ଭ୍ରୁଣ ବୋଭାଇନ୍ ସେରମ୍ (FBS; ପ୍ରତ୍ୟେକ ଗ୍ରୀନ୍, ଜେଜିଆଙ୍ଗ, ଚୀନ୍) ଏବଂ 0.1% ବୋଭାଇନ୍ ବାଇଲ୍ (ସିଗମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍, ସେଣ୍ଟ ମିସ uri ରୀ, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ସହିତ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟ କରାଯାଇଥିଲା | )ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ମାଇକ୍ରୋଏରୋବିକ୍ ଅବସ୍ଥାରେ |ବରଫ ଉପରେ ସମ୍ମିଳିତ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ପ୍ରଜନନ ପାଇଁ 1: 4 ଅନୁପାତରେ ପାସ୍ କରାଯାଇଥିଲା |
ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିବା ପରି ଜିଆର୍ଡିଆ ଡୁଏଡେନମ୍ ସିଷ୍ଟସ୍ ପ୍ରବର୍ତ୍ତାଯାଇଥିଲା [23], ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ ଲୋଗାରିଥମିକ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଅମଳ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା’ପରେ ଏନକାପସୁଲେସନ୍ ପ୍ରବର୍ତ୍ତାଇବା ମାଧ୍ୟମ, pH 7.1 (ପରିବର୍ତ୍ତିତ TYI-S-33) ସହିତ 1 × 106 ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ / ଏମଏଲ୍ ର ଏକ ଘନତ୍ୱରେ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା |ପିତ୍ତଳର ଏକାଗ୍ରତା 0.05% ମଧ୍ୟମ) |ଲୋଗାରିଥମିକ୍ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ 37 ° C ରେ ଟ୍ରାନୋଜୋଜାଇଟ୍ ଆନାର୍ବୋବିକ୍ ଅବସ୍ଥାରେ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା |ସିଷ୍ଟକୁ ଉଦ୍ଦିଷ୍ଟ ମାଧ୍ୟମକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରନ୍ତୁ (pH 7.8; 1% ବାଇଲ୍ ଏକାଗ୍ରତା ସହିତ ପରିବର୍ତ୍ତିତ TYI-S-33 ମାଧ୍ୟମ) ଏବଂ ସଂସ୍କୃତି ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ 37 ° C ରେ 48–96 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରନ୍ତୁ, ଏହି ସମୟରେ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ ଅଧୀନରେ ଗଠନ ସିଷ୍ଟଗୁଡିକ ଦେଖାଗଲା |ଅଧିକାଂଶ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ସ ସିଷ୍ଟ ସୃଷ୍ଟି କରିବାକୁ ପ୍ରେରିତ ହେବା ପରେ, ସଂସ୍କୃତି ମିଶ୍ରଣ ଅମଳ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ସକୁ ଲାଇସ୍ କରିବା ପାଇଁ ନିର୍ଜଳ ଡିଓନାଇଜଡ୍ ପାଣିରେ ପୁନ us ପଠାଗଲା |ମୂଷାମାନଙ୍କରେ ଏକ ଗ୍ୟାଷ୍ଟ୍ରିକ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ପରବର୍ତ୍ତୀ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ସିଷ୍ଟଗୁଡିକ ଗଣନା କରାଯାଇ 4 ° C ରେ ଗଚ୍ଛିତ କରାଯାଇଥିଲା |
ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପରି ଜିଆର୍ଡିଆ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ଭେସିକଲ୍ସ (GEV) ସମୃଦ୍ଧ ହୋଇଥିଲା |ଲୋଗାରିଥମିକ୍ ଅଭିବୃଦ୍ଧି ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ ଗୁଡିକ ପରିବର୍ତ୍ତିତ TYI-S-33 ମାଧ୍ୟମରେ ପୁନ ex ନିର୍ମାଣ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ଏକ୍ସୋଜୋମ୍-ହ୍ରାସ ହୋଇଥିବା FBS (ଜ Bi ବିକ ଶିଳ୍ପ, ବିଟ୍-ହେମେକ୍, ଇସ୍ରାଏଲ୍) ସହିତ 1 × 106 ପରଜୀବୀ / ଏମଏଲ୍ ର ଏକ ଘନତ୍ୱରେ 12 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା |ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ଦ୍ 2000 ାରା 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 2000 ଗ୍ରାମ୍, 45 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 10,000 ଗ୍ରାମ ଏବଂ 60 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 100,000 ଗ୍ରାମ ସଂସ୍କୃତି ଅଲ ern କିକରୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା |ଫସଫେଟ୍ ବଫେର୍ଡ ସାଲାଇନ୍ (ପିବିଏସ୍) ରେ ତରଳାଯାଇଥିଲା, ଏକ ବିସିଏ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଆସେ କିଟ୍ (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍, ୱାଲ୍ଟାମ, MA, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ବ୍ୟବହାର କରି ପରିମାଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ -80 ° C ରେ ସଂରକ୍ଷିତ କରାଯାଇଥିଲା କିମ୍ବା ପରବର୍ତ୍ତୀ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ସିଧାସଳଖ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |
ପ୍ରାଥମିକ ମାଉସ୍ ପେରିଟୋନିଆଲ୍ ମାକ୍ରୋଫେଜ୍ ଗୁଡିକ ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିବା ପରି ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା |ସଂକ୍ଷେପରେ, ମୂଷା (-8-weeks ସପ୍ତାହ ବୟସ) ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଦିଆଗଲା (ଇଣ୍ଟରପେରାଇଟୋନିଆଲ୍ [ip]) 2.5। Ml ମି.ଲି.ଇଉଥାନାସିଆ ପରେ ମୂଷାଙ୍କ ପେଟ ଗୁହାଳରୁ ମାକ୍ରୋଫେଜ୍ ର ଏକ ନିଲମ୍ବନ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 1000 ଗ୍ରାମରେ 3 ଥର ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ କରାଯାଇଥିଲା |ଅମଳ ହୋଇଥିବା କୋଷଗୁଡିକ CD11b ମାର୍କର ବ୍ୟବହାର କରି ଫ୍ଲୋ ସାଇଟୋମେଟ୍ରୀ ଦ୍ det ାରା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିଲା ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ କୋଷର ଶୁଦ୍ଧତା 98% ନଥିଲା, ତା’ପରେ 6-କୂଅ ସଂସ୍କୃତି ସଂସ୍କୃତି ପ୍ଲେଟରେ (4.5 x 106 କୋଷ / କୂଅ) ଯୋଗ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 37 ° C ରେ 10% FBS (ବାୟୋ ଇଣ୍ଡଷ୍ଟ୍ରି) ସହିତ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା |ଏବଂ 5% CO2 |
1 ମିଲି ଟ୍ରାଇଜୋଲ ରିଜେଣ୍ଟ (ଭାଜାଇମ, ନାନଜିଙ୍ଗ, ଚୀନ୍) ରେ 1 × 107 ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ ରୁ RNA ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା, ମୋନସ୍କ୍ରିପ୍ଟ dsDNase (ମୋନାଡ, ୱୁହାନ, ଚୀନ୍) ବ୍ୟବହାର କରି ଜେନୋମିକ୍ DNA ମୋଟ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ RNA ରୁ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସଂପୃକ୍ତ DNA (cDNA) ସିନ୍ଥାଇଜ୍ ହୋଇଥିଲା | ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ MonScript RTIIII ସୁପର ମିକ୍ସ (ମୋନାଡ) ବ୍ୟବହାର କରି |
ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ଜିନ୍ ପାଇଁ CDS କ୍ରମ ସୂଚନା NCBI GenBank ରୁ ମିଳିଥିଲା ​​|ପ୍ରତ୍ୟେକ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିହୀନ କ୍ଲୋନିଂ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ କରିବାକୁ ପ୍ରାଇମର୍ 5.0 ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ |ଫରୱାର୍ଡ ପ୍ରାଇମର୍ (5′-3 ′) ତିନୋଟି ଅଂଶକୁ ନେଇ ଗଠିତ: ଏକ ର ar ଖିକ ଭେକ୍ଟର pcDNA3.1 (+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) ସହିତ ଏକ ଓଭରଲିପ୍ କ୍ରମ ଏବଂ ATG ଏବଂ GNN ଆରମ୍ଭ କର (ଯଦି ପ୍ରଥମ ଆଧାର G ନୁହେଁ) |ଅଭିବ୍ୟକ୍ତିର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ ଏହା କରାଯାଇଥାଏ |ଏହା ସହିତ, ଅତିକମରେ 16 ବିପି ମିଳିତ ବେସ୍ (GC ବିଷୟବସ୍ତୁ 40–60% / Tm ପାଖାପାଖି 55 ° C) |ଓଲଟା ପ୍ରାଇମର୍ (5′-3 ′) ଦୁଇଟି ଅଂଶକୁ ନେଇ ଗଠିତ, ଏକ EcoRV- ର ar ଖିକ ଭେକ୍ଟର pcDNA3.1 (+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) ଏବଂ ଅତି କମରେ 16 bp ର ମିଳିତ ଆଧାର ସହିତ ଏକ ଓଭରଲିପ୍ କ୍ରମ |(ଶେଷ ଦୁଇଟି ଷ୍ଟପକୁ ବାଦ ଦେଇ)ବେସ୍) ଏକ କୋଡନ୍ ଯେପରିକି AA କିମ୍ବା GA ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ପ୍ଲାସିମିଡ୍କୁ ସେମାନଙ୍କର ଲେବଲ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ ପ୍ରକାଶ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦେବାକୁ) |ପ୍ରାଥମିକ କ୍ରମଗୁଡିକ ସାରଣୀ 1 ରେ ତାଲିକାଭୁକ୍ତ ହୋଇଛି ଏବଂ କାଙ୍ଗମେଟ ବାୟୋଟେକ୍ନୋଲୋଜି କୋ।, ଲିମିଟେଡ୍ (ଚାଙ୍ଗଚୁନ୍, ଚୀନ୍) ଦ୍ୱାରା ସିନ୍ଥାଇଜ୍ ହୋଇଛି |
Pfu DNA polymerase (Tiangen, Beijing, China) କିମ୍ବା Ex-taq (Takara Biomedical Technology [ବେଜିଂ] କୋ।, ଲିମିଟେଡ୍, ବେଜିଂ, ଚୀନ୍) ବ୍ୟବହାର କରି ଟାର୍ଗେଟଗୁଡିକ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇଥିଲା |ଇଉକାରିଓଟିକ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ଭେକ୍ଟର ପ୍ଲାସିମ pcDNA3.1 (+) ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ଏନଜାଇମ୍ EcoRV ସହିତ ର ar ଖିକ ଏବଂ ଫାଷ୍ଟ ଏପି (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍) ବ୍ୟବହାର କରି ଡିଫୋସଫୋରୀଲେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା |ରେଖା ବିଶିଷ୍ଟ pcDNA3.1 (+) ଖଣ୍ଡ ଏବଂ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଏକ DNA ଜେଲ୍ ବିଶୋଧନ କିଟ୍ (ଟିଆଙ୍ଗେନ୍) ବ୍ୟବହାର କରି ଶୁଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଏକ ନାନୋଡ୍ରପ୍ ND-2000 (ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍) ବ୍ୟବହାର କରି ପରିମାଣିତ କରାଯାଇଥିଲା |PCDNA3.1 (+) ଖଣ୍ଡ ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଖଣ୍ଡକୁ ମୋନକ୍ଲୋନ୍ ସିଙ୍ଗଲ୍ ଆସେମ୍ବଲି କ୍ଲୋନିଂ ମିଶ୍ରଣ (ମୋନାଡ୍ ବାୟୋଟେକ୍ କୋ।।
ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ମୁକ୍ତ ପ୍ଲାଜାମିଡ୍ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ଏବଂ pcDNA3.1 (+) - ସାନପ୍ରେପ୍ ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ମୁକ୍ତ ପ୍ଲାସିମ୍ ମିନି କିଟ୍ (ସାଙ୍ଗନ୍ ବାୟୋଟେକ୍) ବ୍ୟବହାର କରି ଆଲଫା -3.3 ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା |ଏକାଗ୍ରତା 500 ng / µl ରୁ ଅଧିକ ରଖାଯାଇଥିଲା ଯେ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ ଯେ ଏଲିଟେସନ୍ ବଫର୍ରେ ଥିବା EDTA ଟ୍ରାନ୍ସଫେକ୍ସନ୍ ଆସେରେ ହସ୍ତକ୍ଷେପ କରେ ନାହିଁ |ପ୍ରାଥମିକ ମାଉସ୍ ପେରିଟୋନିଆଲ୍ ମାକ୍ରୋଫେଜ୍ ଗୁଡିକ 6-କୂଅ ପ୍ଲେଟରେ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ RPMI 1640 ମଧ୍ୟମ (ବାୟୋଲୋଜିକାଲ୍ ଇଣ୍ଡଷ୍ଟ୍ରିଜ୍) ସହିତ 12 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା, ତା’ପରେ ପେନିସିଲିନ୍ ଏବଂ ଷ୍ଟ୍ରେପଟୋମାଇସିନ୍ ହଟାଇବା ପାଇଁ କୋଷଗୁଡିକ ଉଷ୍ମ ପିବିଏସରେ 3 ଥର ଧୋଇ ଦିଆଗଲା, ଏବଂ ପରେ ମଧ୍ୟମ ମାଧ୍ୟମରେ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ମାଧ୍ୟମ ସହିତ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟ ହେଲା |ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ମୁକ୍ତ ପ୍ଲାଜାମିଡ୍ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ଏବଂ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -3.3 (2.5 μg) 125 μl ଅପ୍ଟି- MEM ହ୍ରାସ ସେରମ୍ ମାଧ୍ୟମ (ଗିବକୋ, ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍) ରେ ମିଶ୍ରିତ ହୋଇଥିଲା |।ତା’ପରେ 5 µl ଲିପୋଫେକ୍ଟାମାଇନ୍ 2000 ଟ୍ରାନ୍ସଫେକ୍ସନ୍ ରିଜେଣ୍ଟ୍ (ଇନଭାଇଟ୍ରୋଜେନ୍, ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍) 125 µl କମ୍ ସେରମ୍ ଅପ୍ଟି-ଏମ୍ଏମ୍ ମିଡିଆରେ ମିଶ୍ରିତ ହେଲା |ଲିପୋଫେକ୍ଟାମାଇନ୍ 2000 ସହିତ ମିଶ୍ରିତ ଏଣ୍ଡୋଟୋକ୍ସିନ୍ ମୁକ୍ତ ପ୍ଲାସିମ୍ ମିଶ୍ରଣ କରି ଲିପୋସୋମ-ଡିଏନ୍ଏ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହି ମିଶ୍ରଣକୁ 5 ମିନିଟ୍ ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ ଛିଡା ହେବାକୁ ଦିଅନ୍ତୁ |ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ ଥିବା କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ କମ୍ପ୍ଲେକ୍ସଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଥକ ଭାବରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଧୀରେ ଧୀରେ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ |4 ଘଣ୍ଟା ପରେ, ସେଲ୍ ସଂସ୍କୃତି ମାଧ୍ୟମକୁ 2 ମିଲି ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ RPMI 1640 ମଧ୍ୟମ ସହିତ ବଦଳାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ସଂସ୍କୃତି ଜାରି କରାଯାଇଥିଲା |କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ସତେଜ କୋଷ ସଂସ୍କୃତି ମାଧ୍ୟମ ଯୋଗ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଆସେ ଡିଜାଇନ୍ ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି ବିଭିନ୍ନ ସମୟ ପଏଣ୍ଟ ପାଇଁ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା |
ଅଲ ern କିକ ପଦାର୍ଥ ଏବଂ ସେଲ ଲାଇସେଟରୁ ପ୍ରୋଟିନ୍ ନମୁନାଗୁଡିକ ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିବା ପରି ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା |ପ୍ରୋ- IL-1β, ପ୍ରୋ-କାସପେଜ୍ -1, କାସପେଜ୍ -1 p20, NLRP3, β- ଆକ୍ଟିନ୍, ଏବଂ ହିସ୍-ଟ୍ୟାଗ୍ ପାଇଁ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ସ୍ଥାନାନ୍ତର ପାରାମିଟରଗୁଡିକ 200 mA / 90 ମିନିଟ୍ ଥିଲା |ଇଣ୍ଟରଲୁକିନ୍ 1β (IL-1β; R&D ସିଷ୍ଟମ୍, ମିନିନାପଲିସ୍, ମିନେସୋଟା, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର), କାସପେଜ୍ -1 (p20) (ଆଡିପୋଜେନ୍, ସ୍ୱିଜରଲ୍ୟାଣ୍ଡ) ଏବଂ NLRP3 (ଆଡିପୋଜେନ SA, ଏପଲିଙ୍ଗସ୍, ସ୍ୱିଜରଲ୍ୟାଣ୍ଡ) ଏବଂ 1: 5000 ତାଙ୍କ ଟ୍ୟାଗକୁ ଟାର୍ଗେଟ କରି (ଆମିଲେଟ୍ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍, ୱୁହାନ୍, ଚୀନ୍) ଏବଂ β- ଆକ୍ଟିନ୍ (ପ୍ରୋଟିନ୍ଟେକ୍, ୱୁହାନ୍, ଚୀନ୍) |
ଡିସୁକିନିମାଇଡ୍ ସବରେଟ୍ (DSS) ସହିତ କ୍ରସ୍-ଲିଙ୍କ୍ ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିବା ପରି କରାଯାଇଥିଲା |କୋଷଗୁଡିକ ଥଣ୍ଡା ପିବିଏସ୍ ସହିତ 3 ଥର ଧୋଇ ଦିଆଗଲା ଏବଂ 50 µl ASC ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବଫର୍ (pH 8.0) ରେ 27 ଗେଜ୍ ଛୁଞ୍ଚି ସହିତ 25 ମିଟର Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES ଏବଂ 125 mM NaHCO3 ଧାରଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଏହି ମିଶ୍ରଣକୁ 5000 ଗ୍ରାମରେ 3 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପେଲେଟକୁ 10 µl DSS (DMSO ରେ 25 ମିଟର) ଏବଂ 40 µl ASC ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବଫର୍ ସହିତ 37 ° C ରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସିଲ୍ କରାଯାଇଥିଲା |10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 5000 ଗ୍ରାମରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ପରେ, ପେଲେଟ୍ 40 µl ASC ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବଫର୍ ଏବଂ 10 µl 6x ପ୍ରୋଟିନ୍ ଲୋଡିଂ ବଫର୍ (ଟ୍ରାନ୍ସଜେନ୍, ବେଜିଂ, ଚୀନ୍) ର ଦ୍ରବଣରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ ହେଲା, ଏବଂ ପରେ ସମାଧାନ 15 ରୁମ ତାପମାତ୍ରାରେ ବନ୍ଦ ହୋଇଗଲା | ମିନିଟ୍, ତା’ପରେ 10 ମିନିଟ୍ ଫୁଟାନ୍ତୁ |ପ୍ରୋଟିନ୍ ନମୁନାଗୁଡିକ ପ୍ରାଥମିକ ଆଣ୍ଟି- ASC ଆଣ୍ଟିବଡି (ୱାନଲେବିଓ, ଶେଙ୍ଗିଆଙ୍ଗ, ଚୀନ୍) ବ୍ୟବହାର କରି ପାଶ୍ଚାତ୍ୟ ବ୍ଲୋଟିଂର ଶିକାର ହୋଇଥିଲେ: 1: 500 ଅନୁପାତରେ |
ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପ୍ରଣାଳୀ ଅନୁସରଣ କରି [13], କୋଷ ସଂସ୍କୃତି ଅଲ ern କିକ ପଦାର୍ଥଗୁଡିକ ଅମଳ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପ୍ରୋ-ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମେଟୋରୀ ସାଇଟୋକାଇନ୍ IL-1β ର ମୂଷା IL-1 ବିଟା ଏଲିସା କିଟ୍ (ଇନଭାଇଟ୍ରୋଜେନ୍, ଥର୍ମୋ ଫିସର ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍) ବ୍ୟବହାର କରି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |IL-1β ମାନକ ବକ୍ର ବ୍ୟବହାର କରି OD450nm ମୂଲ୍ୟକୁ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏକାଗ୍ରତାରେ ରୂପାନ୍ତର କରନ୍ତୁ |
କଭର୍ଲିପ୍ସରେ ଆବୃତ କୋଷଗୁଡିକ ଉଷ୍ମ ପିବିଏସରେ 3 ଥର ଧୀରେ ଧୀରେ ଧୋଇ ଦିଆଗଲା, ଟିସୁ ସେଲ୍ ଫିକ୍ସିଟିଭ୍ (ବାୟୋଶର୍ପ, ବେଜିଂ, ଚୀନ୍) ରୁମ ତାପମାତ୍ରାରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା, 0.1% ଟ୍ରିଟନ୍ ଏକ୍ସ-ପର୍ମିବିଲିଜ୍ 100 ରେ (ପିବିଏସରେ ମିଶ୍ରିତ; ବାୟୋଶର୍ପ; ରୁମ ତାପମାତ୍ରାରେ 20 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଏବଂ 5% ବୋଭାଇନ୍ ସେରମ୍ ଆଲବମିନରେ (ପିବିଏସରେ) ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ 2 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଅବରୋଧ କରନ୍ତୁ |ସେଲ୍ ଗୁଡିକ ଯଥାକ୍ରମେ ASC (1: 100 dilution) କିମ୍ବା NLRP3 (1: 100 dilution) ବିରୁଦ୍ଧରେ ପ୍ରାଥମିକ ଆଣ୍ଟିବଡି ସହିତ 4 ° C ରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ Cy3 ଛେଳି ଆଣ୍ଟି ରାବଟ୍ IgG (H + L) (1: 400; EarthOx) ନାମରେ ନାମିତ ହେଲା | , ସାନ ଫ୍ରାନ୍ସିସ୍କୋ, CA, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) କିମ୍ବା FITC- କଞ୍ଜୁଗେଟେଡ୍ ଛେଳି ଆଣ୍ଟି-ମାଉସ୍ IgG (1: 400; ଆର୍ଥୋକ୍ସ) ରାତାରାତି 37 ° C ଅନ୍ଧାରରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ |ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟଗୁଡିକ Hoechst 33258 (10 μg / ml; UE, Suzhou, China) ସହିତ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଦାଗିତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ (ଅଲିମ୍ପସ୍ କର୍ପୋରେସନ୍, ଟୋକିଓ, ଜାପାନ) ରେ ପାଳନ କରାଯାଇଥିଲା |
ମୂଷାମାନଙ୍କୁ ଚାରୋଟି ଗୋଷ୍ଠୀରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା (ପ୍ରତ୍ୟେକ ଗୋଷ୍ଠୀରେ n = 7): (i) ପିବିଏସ୍-ଚିକିତ୍ସିତ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ (କେବଳ ପିବିଏସ୍; ଗାଭେଜ୍ 100 µl / ମାଉସ୍ ପିବିଏସ୍ ଏବଂ ଦ daily ନିକ ଇଣ୍ଟରପେରାଇଟୋନିଆଲ୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍ 100 µl / ମାଉସ୍ PBS 3 ଘଣ୍ଟା ପରେ) |, କ୍ରମାଗତ ଭାବରେ 7 ଦିନ ପାଇଁ);:(iii) ଜି।(iv) ଜି।ପ୍ରତ୍ୟେକ ମାଉସର ଶରୀରର ଓଜନ ପ୍ରତିଦିନ ନଜର ରଖାଯାଉଥିଲା ଏବଂ ସମସ୍ତ ମୂଷା ସପ୍ତମ ଦିନରେ ଇଉଥାନାଇଜ୍ ହୋଇଥିଲେ |ଅମଳ ହୋଇଥିବା ଡୁଏଡେନମ୍ (cm ସେମି ଲମ୍ବ) କୁ ml ୦ ମି.ଲି.ହେମାଟୋକ୍ସିଲିନ୍ ଏବଂ ଇଓସିନ୍ (H&E) ଦାଗ ପାଇଁ ସତେଜ ଡୁଏଡେନମ୍ (cm ସେମି ଲମ୍ବ) ଅଲଗା କରାଯାଇଥିଲା |
ମୂଷାମାନଙ୍କୁ ଦୁଇଟି ଗୋଷ୍ଠୀରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା: (i) MOCK ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ଏବଂ (ii) MCC950 ନିରୋଧକ ଗୋଷ୍ଠୀ |ପ୍ରତ୍ୟେକ ଗୋଷ୍ଠୀରେ ପାଞ୍ଚଟି ଚିକିତ୍ସା ଥିଲା (n = 7 / ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ): (i) ପିବିଏସ୍ ଚିକିତ୍ସା ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ (କେବଳ ପିବିଏସ୍; 100 µl / ମାଉସ୍ ପିବିଏସ୍, ଇଣ୍ଟ୍ରାମୁସ୍କୁଲାର୍ (IM) ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍ (ଟିବିଆଲିସ୍ ଆଣ୍ଟିରିଅର୍) [28, 29]; ( ii) pcDNA3.1 (+) ପ୍ଲାସିମ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ (100 µg / ମାଉସ୍ DNA, ଇଣ୍ଟ୍ରାମୁସ୍କୁଲାର ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍ ମାଧ୍ୟମରେ) (iii) ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟ ସଂକ୍ରମଣ ସକରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ (1.5 x 106 ସିଷ୍ଟ / ମାଉସ୍, ଗାଭେଜ୍ ମାଧ୍ୟମରେ) (iv) a; ଗୋଷ୍ଠୀ ପ୍ଲାସିମ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 (100 μg / ମାଉସ୍ DNA, ଇଣ୍ଟ୍ରାମୁସ୍କୁଲାର ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍ ଦ୍ treated ାରା) ଏବଂ (v) ପ୍ଲାସିମ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା-7.3 (100 µg / ମାଉସ୍) ସହିତ ଚିକିତ୍ସିତ ଗୋଷ୍ଠୀ | ଡିଏନ୍ଏ, 12 ଘଣ୍ଟା ଅତିକ୍ରମ କରିବା ପରେ, MCC950 ଇନହିବିଟର ଗୋଷ୍ଠୀର ମୂଷାମାନେ 7 ଦିନ ପାଇଁ MCC950 (10 ମିଗ୍ରା / କେଜି ଶରୀରର ଓଜନ) ର ଦ daily ନିକ ଇଣ୍ଟରପେରାଇଟୋନିଆଲ୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍ ପାଇଲେ, MOCK ଗୋଷ୍ଠୀର ମୂଷାମାନେ ସମାନ ପରିମାଣର ପିବିଏସ୍ ଚିକିତ୍ସା ପାଇଲେ | ରକ୍ତ ନମୁନାଗୁଡିକ | ଆଇବଲ୍ସ ମୂଷାମାନଙ୍କଠାରୁ ସଂଗୃହିତ ଏବଂ ରାତିସାରା ° ° C ରେ ଛାଡି ଦିଆଗଲା |
ପଚିଶ ମୂଷାଙ୍କୁ ପାଞ୍ଚଟି ଦଳରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା (n = 7 / ଗୋଷ୍ଠୀ) |ଗ୍ରୁପ୍ 1 ହେଉଛି ଏକ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ଯାହାକି ପିବିଏସ୍ ସହିତ ଚିକିତ୍ସିତ ହୋଇଥିଲା: ମୂଷାମାନେ 100 μl PBS ଇଣ୍ଟ୍ରାମୁସ୍କୁଲାର ଏବଂ 3 ଦିନ ପରେ ଗାଭେଜ୍ ଦ୍ୱାରା ଗ୍ରହଣ କରିଥିଲେ |ଗ୍ରୁପ୍ 2 ହେଉଛି ଜି ଡୁଡୋଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟସ୍ ଦ୍ infected ାରା ସଂକ୍ରମିତ ଏକ ସକରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ: ମୂଷାମାନଙ୍କୁ 100 μl PBS ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ 3 ଦିନ ପରେ 1.5 x 106 ସିଷ୍ଟ / ମାଉସ୍ ଇଣ୍ଟ୍ରାଗ୍ରାଷ୍ଟ୍ରିକ୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଦିଆଯାଇଥିଲା |ତୃତୀୟ ଗୋଷ୍ଠୀ - pcDNA3.1 (+) ସହିତ ପ୍ଲାସିମ ପ୍ରତିରୋପଣ ଦ୍ od ାରା ଦ୍ od ାଦଶ ସିଷ୍ଟ ସଂକ୍ରମଣ ପାଇଁ ଏକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ମିଶି: ମୂଷାମାନେ 100 μg ପ୍ଲାସିମ DNA pcDNA3.1 (+) (im) ମ ally ଖିକ ଭାବରେ, 1.5 × 106 ସିଷ୍ଟ / ମାଉସ୍ 3 ପାଇଲେ | ଦିନଗ୍ରୁପ୍ 4 ଏବଂ 5 ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ପ୍ଲାସିମ୍ କିମ୍ବା pcDNA3.1 (+) - ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟ ସଂକ୍ରମଣ ସହିତ ଆଲଫା -3। Gi ଗିଆର୍ଡାଇନ୍ ପ୍ଲାସିମ୍ |ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀ: ମୂଷାମାନେ 100 µg pcDNA3 ପାଇଲେ |1 (+) - ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ପ୍ଲାସିମ୍ DNA (im), ତା’ପରେ 3 ଦିନ ପରେ, 1.5 × 106 ସିଷ୍ଟ / ମାଉସ୍ ଗାଭେଜ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଦିଆଗଲା |ଟ୍ୟୁବ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟର ପ୍ରବର୍ତ୍ତନ ପରେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ମାଉସର ଶରୀରର ଓଜନ ଉପରେ ନଜର ରଖାଯାଇଥିଲା |ପରଜୀବୀ ଲୋଡ୍ ମାପ ଏବଂ HE ଦାଗ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ସତେଜ ଡୁଏଡେନମ୍ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା |
ପୂର୍ବରୁ ପ୍ରକାଶିତ ପ୍ରଣାଳୀ ଅନୁଯାୟୀ ହିଷ୍ଟୋପାଥୋଲୋଜିକାଲ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନଗୁଡିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ସତେଜ ଡୁଏଡେନମ୍ ଟିସୁ ସେଲ୍ ଫିକ୍ସିଟିଭ୍ ସହିତ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା, ପାରାଫିନ୍ରେ ଏମ୍ବେଡ୍ ହୋଇ 4 μ ମିଟର ବିଭାଗରେ କାଟି H&E ସହିତ ଦାଗଯୁକ୍ତ ଏବଂ ହାଲୁକା ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ ଅଧୀନରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ସାତଟି ସ୍ independent ାଧୀନ ମୂଷାଙ୍କ ଠାରୁ ସାତୋଟି ଟିସୁ ବିଭାଗରେ ପ୍ରତିନିଧୀ ପାଥୋଲୋଜିକାଲ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନଗୁଡିକ ଚିକିତ୍ସା ବିଷୟରେ ଜାଣି ନ ଥିବା ଜଣେ ପାଥୋଲୋଜିଷ୍ଟଙ୍କ ଦ୍ evalu ାରା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 200x ବୃଦ୍ଧିରେ ଧରାଯାଇଥିଲା |ଭିଲିର ଲମ୍ବ ଏବଂ କ୍ରିପ୍ଟର ଗଭୀରତା ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପଦ୍ଧତି ଅନୁଯାୟୀ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା |
ଭିଟ୍ରୋ ଏବଂ ଭିଭୋରେ ଫଳାଫଳ ଟ୍ରିପ୍ଲିକେଟ୍ ରେ ମିଳିଲା |ଗ୍ରାଫପ୍ୟାଡ ପ୍ରିଜିମ 7.00 (ଗ୍ରାଫପ୍ୟାଡ ସଫ୍ଟୱେୟାର ଇନକ।, ଲା ଜୋଲା, CA, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ବ୍ୟବହାର କରି ଗ୍ରାଫ ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା |ଟି-ଟେଷ୍ଟ ଦ୍ two ାରା ଦୁଇଟି ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିବାବେଳେ ≥3 ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟକୁ SPSS ସଫ୍ଟୱେୟାର (ସଂସ୍କରଣ 22.0; SPSS ଆଇବିଏମ୍ କର୍ପୋରେଟ୍, ଆର୍ମୋନ୍କ, NY, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ବ୍ୟବହାର କରି ଭିନ୍ନତା (ANOVA) ର ଏକପାଖିଆ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଲେଭେନ୍ଙ୍କ ଟେଷ୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରି ଭିନ୍ନତା ର ଏକତା ପାଇଁ ତଥ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପରେ ବୋନଫେରୋନିଙ୍କ ପୋଷ୍ଟ ହକ୍ ଟେଷ୍ଟ (B) |ମହତ୍ତ୍ P କୁ P <0.05, P <0.01, ଏବଂ P <0.001 (ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ନୁହେଁ [ns]) (P> 0.05) ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଥାଏ |
ଜିନ୍ ଏବଂ ଜେନୋମସ୍ (KEGG) ର କାଇଟୋ ଏନସାଇକ୍ଲୋପିଡିଆରେ GEV ପ୍ରୋଟୋମିକ୍ସର ଆମର ପୂର୍ବ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦର୍ଶାଇଲା ଯେ ପ୍ରଦାହକାରୀ ସିଗନାଲ୍ ପଥଗୁଡିକର ସକ୍ରିୟକରଣରେ ଅନେକ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜଡିତ ହୋଇପାରେ |ଆମେ ଦୁଇଟି ପ୍ରତିଜ୍ଞାକାରୀ ଲକ୍ଷ୍ୟ, ଆଲଫା -2 ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡିନ ଚୟନ କରିଛୁ, ଏହି ଅଣୁଗୁଡ଼ିକୁ ବ pl ଼ାଇ pcDNA3.1 (+) ଇଉକାରିଓଟିକ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ଭେକ୍ଟର ନିର୍ମାଣରେ ବ୍ୟବହାର କରୁ |କ୍ରମ ପରେ, ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ପ୍ଲାସିମିଡ୍ ପ୍ରାଥମିକ ମାଉସ୍ ପେରିଟୋନିଆଲ୍ ମାକ୍ରୋଫେଜ୍ରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହେଲା ଏବଂ ପ୍ରଦାହର କାସପେଜ୍ -1 p20 ସ୍ sign ାକ୍ଷର ପ୍ରୋଟିନ୍ (ସକ୍ରିୟ କାସପେଜ୍ -1 ର ଏକ ଖଣ୍ଡ) ଚିହ୍ନଟ ହେଲା | ମୁଖ୍ୟ ଅଣୁଗୁଡିକ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିବା ଯାହା ପ୍ରଦାହକୁ ଟ୍ରିଗର କରିପାରିବ |ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ଦର୍ଶାଇଲା ଯେ ଆଲଫା-୨ ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ସ GEV ପରି p20 କାସପେଜ୍ -1 ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସୃଷ୍ଟି କରିପାରିବ |ଚିକିତ୍ସା ହୋଇନଥିବା ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ (କେବଳ ପିବିଏସ୍) ଏବଂ ପ୍ଲାସିମ୍ କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ pcDNA3.1 (+) ରେ କାସପେଜ୍ -1 ଆକ୍ଟିଭେସନ୍ ଉପରେ କ effect ଣସି ପ୍ରଭାବ ମିଳିଲା ନାହିଁ (ଚିତ୍ର 1) |
PcDNA3.1 (+) ଦ୍ p ାରା p20 କାସପେଜ୍ -1 ସକ୍ରିୟତାର ମାପ - ଆଲଫା -2 ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡିନସ୍ |ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଇଉକାରିଓଟିକ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ପ୍ଲାସିମିଡ୍ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ସ (ପ୍ରତ୍ୟେକ ଗାଡ଼ି ଉପରେ) ପ୍ରାଥମିକ ମାଉସ୍ ପେରିଟୋନିଆଲ୍ ମାକ୍ରୋଫେଜ୍ରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ 24 ଘଣ୍ଟା ପରେ ସଂସ୍କୃତି ସୁପରନେଟାଣ୍ଟ ଅମଳ କରାଯାଇଥିଲା |ପାଶ୍ଚାତ୍ୟ ବ୍ଲୋଟିଂ ସ୍ sign ାକ୍ଷର କାସପେଜ୍ -1 p20 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ପ୍ରୋଟିନର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତର ମାପିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |କେବଳ PBS- ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ (ଗାଡ଼ି C) ଏବଂ pcDNA3.1 (+) ମୋନୋଥେରାପି ଗ୍ରୁପ୍ (pcDNA3.1 ଗାଡ଼ି) ଏକ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ GEV ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀକୁ ଏକ ସକରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା |ପ୍ରତ୍ୟେକ ପ୍ରୋଟିନରେ ଏକ ହିଷ୍ଟିଡାଇନ୍ ଟ୍ୟାଗ୍ ଚିହ୍ନଟ କରି ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ପ୍ରୋଟିନର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ନିଶ୍ଚିତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ଆଶା କରାଯାଉଥିବା ପ୍ରୋଟିନ୍ ବ୍ୟାଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ହେଲା ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ (38.2 kDa) ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ (37.2 kDa) |GEV, Giardia duodenum extracellular vesicles, pcDNA3.1 (+), EcoRV-linearized vector, SUP, supernatant
ଆଲଫା-୨ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ p20 କାସପେଜ୍ -1 ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସୃଷ୍ଟି କରେ କି ନାହିଁ ତାହା ସ୍ଥିର କରିବାକୁ ଏବଂ ହୋଷ୍ଟ NLRP3 ପ୍ରଦାହଜନକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା, pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -7.3 ଜିଆର୍ଡିନକୁ ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ପ୍ଲାସିମ ଡିଏନଏ ସହିତ ପ୍ରାଥମିକ ମାଉସ ପେରିଟୋନିଆଲ ମାକ୍ରୋଫେଜରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ମୁଖ୍ୟ ପ୍ରଦାହକାରୀ ପ୍ରୋଟିନ୍ NLRP3 ର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି, ଲୋକାଲାଇଜେସନ୍ ଏବଂ ଅଲିଗୋମେରାଇଜେସନ୍ ସ୍ତର ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |ଏହି ପରୀକ୍ଷଣରେ, GEV ସକରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା, ଏବଂ କ treatment ଣସି ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ (କେବଳ ପିବିଏସ୍) କିମ୍ବା pcDNA3.1 (+) ଟ୍ରାନ୍ସଫେକ୍ସନ୍ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ନକାରାତ୍ମକ ଗୋଷ୍ଠୀ ନଥିଲା |ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ଦର୍ଶାଇଲା ଯେ, GEV ଗୋଷ୍ଠୀ ପରି, ଜିଆର୍ଡିନ pcDNA3.1 (+) ର ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ପ୍ଲାସିମ DNA - ଆଲଫା -2 ଏବଂ ଜିଆର୍ଡିନ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -3.3 ଫଳାଫଳ NLRP3, ପ୍ରୋ-ଆଇଏଲ -1β ଏବଂ procaspase-1 ଏବଂ caspase-1 ଆକ୍ଟିଭେସନ୍ (ଚିତ୍ର 2a) |ଏହା ସହିତ, ଉଭୟ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ମହତ୍ IL ପୂର୍ଣ୍ଣ IL-1β ଗୁପ୍ତତା (pcDNA3.1: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P = 0.1000; ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P = 0.0007 );ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P <0.0001;GEV: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (ଚିତ୍ର 2 ବି) |ଅଧିକାଂଶ ASC ପ୍ରୋଟିନ୍ ନୋ-ଟ୍ରିଟମେଣ୍ଟ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ରେ କିମ୍ବା pcDNA3.1 (+) ପ୍ଲାସିମ୍ ସହିତ ଟ୍ରାନ୍ସଫେକ୍ଟ ହୋଇଥିବା ଗ୍ରୁପ୍ ରେ ମୋନୋମେରିକ୍ ଥିଲା, pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 କିମ୍ବା pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା- 7.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ |ଏକ ଅଲିଗୋମେରିକ୍ ଫର୍ମ (ଚିତ୍ର 2c) ଦେଖାଇ GEV ପଜିଟିଭ୍ କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ ଗ୍ରୁପ୍ କିମ୍ବା ଗୋଷ୍ଠୀର ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ପ୍ଲାସିମ DNA ରେ ASC ଅଲିଗୋମେରାଇଜେସନ୍ ଘଟିଥିଲା ​​|ଏହି ପ୍ରାଥମିକ ତଥ୍ୟରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଆଲଫା-୨ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ ଆଲଫା -3,3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ NLRP3 ପ୍ରଦାହ ସକ୍ରିୟତାକୁ ପ୍ରବର୍ତ୍ତାଇପାରେ |ASC ଏବଂ NLRP3 ର ଲୋକାଲାଇଜେସନ୍ ର ପରବର୍ତ୍ତୀ ଇମ୍ୟୁନୋଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀରେ, ASC ପ୍ରୋଟିନ୍ ସାଇଟୋପ୍ଲାଜାମରେ ବିଛା ଯାଇଥିଲା ଏବଂ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ସହିତ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ କିମ୍ବା pcDNA3 ସହିତ ଏକ ଡଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ଭାବରେ ଦେଖାଗଲା |1 (+) - ଆଲଫା -3,3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଗୋଷ୍ଠୀ କିମ୍ବା GEV ସକରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ (ଚିତ୍ର 2d) |ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏବଂ ପ୍ଲାସିମ-ଚିକିତ୍ସିତ pcDNA 3.1 ଗୋଷ୍ଠୀରେ, NLRP3 ପ୍ରୋଟିନ୍ ସଙ୍କେତ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇନଥିବାବେଳେ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ କିମ୍ବା pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -3 .3 ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ଡଟ୍ | ଚିହ୍ନଟ ହେଲା |।ସାଇଟୋପ୍ଲାଜାମରେ କିମ୍ବା HEV ର ଉତ୍ତେଜନାରେ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ମିଳିଥାଏ (ଚିତ୍ର 2e) |ଏହି ତଥ୍ୟଗୁଡିକ ଆହୁରି ଦର୍ଶାଏ ଯେ G. duodenalis giardin alpha-2 ଏବଂ giardin alpha-7.3 ମାଉସ୍ ପ୍ରାଥମିକ ପେରିଟୋନିଆଲ୍ ମାକ୍ରୋଫେଜ୍ ଗୁଡିକରେ NLRP3 ଇନଫ୍ଲାସୋମୋକୁ ସକ୍ରିୟ କରିଥାଏ |
cରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଇଉକାରିଓଟିକ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ପ୍ଲାସିମିଡ୍ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡିନ ଏବଂ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡିନକୁ ପ୍ରାଥମିକ ମୁରିନ୍ ପେରିଟୋନିଆଲ୍ ମାକ୍ରୋଫେଜ୍ ଏବଂ କୋଷରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ, କିମ୍ବା ଅଭିବ୍ୟକ୍ତିର ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ 24 ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ ଅଲ ern କିକ ଶକ୍ତି ଅମଳ କରନ୍ତୁ | , ଗୁପ୍ତଏବଂ ମୁଖ୍ୟ ପ୍ରଦାହକାରୀ ପ୍ରୋଟିନଗୁଡିକର ଲୋକାଲାଇଜେସନ୍ |ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ PBS- କେବଳ (C) ଗୋଷ୍ଠୀ ଏବଂ pcDNA3.1 (+) ଏକକ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ GEV ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ସକରାତ୍ମକ ଗୋଷ୍ଠୀ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ପାଶ୍ଚାତ୍ୟ ବ୍ଲୋଟିଂ ଦ୍ୱାରା NLRP3, ପ୍ରୋ- IL-1β, ପ୍ରୋ-କାସପେଜ୍ -1, ଏବଂ p20 କାସପେଜ୍ -1 ସହିତ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ପ୍ରଦାହକାରୀ ପ୍ରୋଟିନ୍ NLRP3 ଚିହ୍ନଟ ହେଲା |b ଅଲ ern କିକ ପଦାର୍ଥରେ IL-1β ର ଗୁପ୍ତ ସ୍ତରଗୁଡିକ ଏନଜାଇମ୍-ଲିଙ୍କ୍ ହୋଇଥିବା ଇମ୍ୟୁନୋସର୍ବାଣ୍ଟ ଆସେ (ELISA) ବ୍ୟବହାର କରି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏବଂ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ SPSS ସଫ୍ଟୱେର୍ ସଂସ୍କରଣ 22.0 ବ୍ୟବହାର କରି ଭିନ୍ନତା (ANOVA) ର ଏକପାଖିଆ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଆଷ୍ଟେରିସ୍କ ଗୋଷ୍ଠୀ ** P <0.01 ଏବଂ *** P <0.001 ମଧ୍ୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ |c ପେଲେଟରେ ASC ଅଲିଗୋମେରାଇଜେସନ୍ ସ୍ତର DSS କ୍ରସ୍-ଲିଙ୍କ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ determined ାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଉଥିବାବେଳେ ସେଲ୍ ଲାଇସେଟ୍ରେ ASC ସ୍ତର ଏକ ଲୋଡିଂ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |d ଇମ୍ୟୁନୋଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ବ୍ୟବହାର କରି ISC ଲୋକାଲାଇଜେସନ୍ ର ଭିଜୁଆଲାଇଜେସନ୍ |e NLRP3 ର ଲୋକାଲାଇଜେସନ୍ ଭିଜୁଆଲ୍ କରିବାକୁ ଇମ୍ୟୁନୋଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା |ASC, ଆପୋପଟୋଟିକ୍ ସ୍ପେକ୍ ପରି ପ୍ରୋଟିନ୍;ଆଇଏଲ୍, ଇଣ୍ଟରଲୁକିନ୍;NLRP3, nucleotide-binding oligomerization-like receptor 3;ns, ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ନୁହେଁ (P> 0.05)
ଉଭୟ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ଏବଂ ଏହା ଗୁପ୍ତ ଥିବା GEV ଗୁଡିକ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମକୁ ସକ୍ରିୟ କରିଥାଏ ଏବଂ ଭିଟ୍ରୋରେ ହୋଷ୍ଟ ପ୍ରଦାହକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିଥାଏ |ଏହିପରି, ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସର ରୋଗ ଜନିତ ରୋଗରେ NLRP3 ଇନଫ୍ଲାସୋମ୍ର ଭୂମିକା ଅସ୍ପଷ୍ଟ ରହିଛି |ଏହି ସମସ୍ୟାର ଅନୁସନ୍ଧାନ ପାଇଁ, ଆମେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟରେ ସଂକ୍ରମିତ ମୂଷା ଏବଂ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟ + MCC950 ଇନହିବିଟର ଚିକିତ୍ସା ଦ୍ infected ାରା ସଂକ୍ରମିତ ମୂଷାଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ଏକ ପରୀକ୍ଷଣର ପରିକଳ୍ପନା କରିଥିଲୁ ଏବଂ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟରେ ସଂକ୍ରମିତ ହେଲେ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ତୁଳନା କରିଥିଲୁ।ପରୀକ୍ଷଣର ଏକ ବିସ୍ତୃତ ଯୋଜନା ଚିତ୍ର 3a ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି |ବିଭିନ୍ନ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀରେ ମୂଷାଙ୍କ ଶରୀରର ଓଜନ ପରିବର୍ତ୍ତନକୁ ସିଷ୍ଟସ୍ ସଂକ୍ରମଣ ପରେ 7 ଦିନ ପାଇଁ ନଜର ରଖାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ଚିତ୍ର 3b ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି |ଖାଣ୍ଟି ପିବିଏସ୍ ସହିତ ଚିକିତ୍ସିତ ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ, ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ଦର୍ଶାଇଲା ଯେ (i) ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟରେ ସଂକ୍ରମିତ ମୂଷାଙ୍କ ଶରୀରର ଓଜନ ସଂକ୍ରମଣ ପରେ ଦିନ 3 ରୁ 7 ଦିନ ହ୍ରାସ ପାଇଲା;(ii) ମୂଷାଙ୍କ ଶରୀରର ଓଜନ ଉପରେ MCC950 ଇନହିବିଟର ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କ significant ଣସି ବିଶେଷ ପ୍ରଭାବ ପକାଇ ନଥିଲା |।ଏକକ ସଂକ୍ରମଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ, MCC950 ସହିତ ଚିକିତ୍ସିତ ଡୁଏଡେନାଲ୍ ସଂକ୍ରମଣ ଗୋଷ୍ଠୀର BW ବିଭିନ୍ନ ଡିଗ୍ରୀକୁ ହ୍ରାସ ପାଇଲା (ଦିନ 1: ANOVA, F (3, 24) = 1.885, P = 0.0148; ଦିନ 2: ANOVA, F (3, 24) ) = 0.4602, P <0.0001 ଦିନ 3: ANOVA, F (3, 24) = 0.8360, P = 0.0010 ଦିନ 4: ANOVA, F (3, 24) = 1.683, P = 0.0052; (3, 24) = 0.6497, P = 0.0645 ଦିନ 6: ANOVA, F (3, 24) = 5.457, P = 0.0175 ଦିନ 7: ANOVA, F (3, 24) = 2.893, P = 0.0202) |ଏହି ତଥ୍ୟଗୁଡିକ ଦର୍ଶାଏ ଯେ NLRP3 ଇନଫ୍ଲାସମୋମ ମୂଷାମାନଙ୍କୁ ଡୁଏଡେନାଲ୍ ସଂକ୍ରମଣର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ (2-4 ଦିନ) ଗୁରୁତ୍ weight ପୂର୍ଣ୍ଣ ଓଜନ ହ୍ରାସରୁ ରକ୍ଷା କରିଥାଏ |ଆମେ ତାପରେ ଡୁଏଡେନାଲ୍ ଲାଭେଜ୍ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ରେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିବାକୁ ଲକ୍ଷ୍ୟ ରଖିଥିଲୁ ଏବଂ ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ଚିତ୍ର 3c ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଥିଲା |ଜି।କେବଳ PBS ଏବଂ MCC950 ସହିତ ଚିକିତ୍ସିତ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ତୁଳନାରେ, HE ସହିତ ଦାଗଯୁକ୍ତ ଡୁଏଡେନାଲ୍ ଟିସୁ ଦେଖାଗଲା: ) ଏବଂ କ୍ରିପ୍ଟ ଆଟ୍ରୋଫି (ANOVA, F (3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟସ୍ ଦ୍ infected ାରା ସଂକ୍ରମିତ ମୂଷାମାନଙ୍କରୁ ଡୁଏଡେନମ୍ ଏବଂ MCC950 ଇନହିବିଟର ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଏ |ଡୁଏଡେନାଲ୍ ଭିଲି କ୍ଷତିଗ୍ରସ୍ତ ଏବଂ ମୃତ (ANOVA, F (3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) ଆଟ୍ରୋଫି ଏବଂ କ୍ରିପ୍ଟ ଶାଖା (ANOVA, F (3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (ଚିତ୍ର 3d- ଚ)ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ସୂଚିତ କରେ ଯେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସର ରୋଗ ଜନିତ ରୋଗ ହ୍ରାସ କରିବାରେ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ଏକ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରିଥାଏ |
ଜିଆର୍ଡିଆ ଡୁଡୋଡେନମ୍ ସଂକ୍ରମଣରେ NLRP3 ଇନଫ୍ଲାସୋମ୍ର ଭୂମିକା |ମୂଷାମାନେ ଡୁଏଡେନୋକୋକାଲ୍ ସିଷ୍ଟସ୍ ସହିତ ଗ୍ୟାଭେଜ୍ ହୋଇଥିଲେ ଏବଂ ପରେ MCC950 (ip) ସହିତ କିମ୍ବା ବିନା ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା |ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ PBS କିମ୍ବା MCC950 ସହିତ ଏକକ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା |ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀ ଏବଂ ଚିକିତ୍ସା ବ୍ୟବସ୍ଥା |b ବିଭିନ୍ନ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀର ମୂଷାଙ୍କ ଶରୀରର ଓଜନ 7 ଦିନ ଉପରେ ନଜର ରଖାଯାଇଥିଲା |ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସଂକ୍ରମଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ଏବଂ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ + MCC950 ସଂକ୍ରମଣ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ SPSS ସଫ୍ଟୱେର୍ ସଂସ୍କରଣ 22.0 ବ୍ୟବହାର କରି ଟି-ଟେଷ୍ଟ ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଆଷ୍ଟେରିସ୍କ * P <0.05, ** P <0.01, କିମ୍ବା *** P <0.001 ରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ |c ଡୁଏଡେନାଲ୍ ଲାଭେଜ୍ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ରେ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ ସଂଖ୍ୟା ଗଣନା କରି ପରଜୀବୀ ଭାର ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସଂକ୍ରମଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ଏବଂ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ + MCC950 ସଂକ୍ରମଣ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ SPSS ସଫ୍ଟୱେର୍ ସଂସ୍କରଣ 22.0 ବ୍ୟବହାର କରି ଟି-ଟେଷ୍ଟ ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଆଷ୍ଟେରିସ୍କ * P <0.05 ରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ |d ହେମାଟୋକ୍ସିଲିନ୍ ଏବଂ ଇଓସିନ୍ (H&E) ଡୁଏଡେନାଲ୍ ହିଷ୍ଟୋପାଥୋଲୋଜିର ଦାଗ ଫଳାଫଳ |ଲାଲ୍ ତୀରଗୁଡ଼ିକ ଭିଲିର କ୍ଷତି ସୂଚାଇଥାଏ, ସବୁଜ ତୀରଗୁଡ଼ିକ କ୍ରିପ୍ଟଗୁଡିକର କ୍ଷତି ସୂଚାଇଥାଏ |ମାପ ଦଣ୍ଡ: 100 µ ମି।e, f ଡୁଏଡେନାଲ୍ ଭିଲସ୍ ଉଚ୍ଚତା ଏବଂ ମାଉସ୍ କ୍ରିପ୍ଟ ଉଚ୍ଚତାର ପରିସଂଖ୍ୟାନ ବିଶ୍ଳେଷଣ |ଆଷ୍ଟେରିସ୍କ * P <0.05 ଏବଂ ** P <0.01 ରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ |7 ଟି ସ୍ independent ାଧୀନ ଜ bi ବିକ ପରୀକ୍ଷଣରୁ ଫଳାଫଳ ନିଆଯାଇଛି |BW, ଶରୀରର ଓଜନ;ig, ଇଣ୍ଟ୍ରାଗାଷ୍ଟ୍ରିକ୍ ବିତରଣ ମାର୍ଗ;ip, ଇଣ୍ଟରପେରାଇଟୋନିଆଲ୍ ବିତରଣ ମାର୍ଗ;ns, ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ନୁହେଁ (P> 0.05);ପିବିଏସ୍, ଫସଫେଟ୍ ବଫର୍ଡ ସାଲାଇନ୍;WT, ବନ୍ୟ ପ୍ରକାର |
IL-1β ର ଗୁପ୍ତତା ହେଉଛି ପ୍ରଦାହ ସକ୍ରିୟତାର ଏକ ଚିହ୍ନ |ଜି।ପରୀକ୍ଷଣର ଏକ ବିସ୍ତୃତ ଯୋଜନା ଚିତ୍ର 4a ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି |ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀଗୁଡ଼ିକରେ ପିବିଏସ୍, ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟ ଚିକିତ୍ସା ସହିତ ଗାଭେଜ୍, pcDNA3.1 ର ଇଣ୍ଟ୍ରାମୁସ୍କୁଲାର ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍, ଏବଂ pcDNA3.1 (+) ର ଇଣ୍ଟ୍ରାମୁସ୍କୁଲାର ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍ - ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ କିମ୍ବା pcDNA3.1-ଆଲଫା-7.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ରହିଥିଲା ​​|ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ପ୍ଲାସିମ୍ର ଇଣ୍ଟ୍ରାମୁସ୍କୁଲାର ପ୍ରଶାସନର ସପ୍ତମ ଦିନରେ, ସେରମ୍ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଗୋଷ୍ଠୀରେ IL-1β ସ୍ତର ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |ଚିତ୍ର 4b ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି, MOCK ଗୋଷ୍ଠୀରେ: (i) ପିବିଏସ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ତୁଳନାରେ, pcDNA3.1 ଚିକିତ୍ସାର IL-1β ଗୁପ୍ତତା (ANOVA, F (4.29) = 4.062, P = 0.9998) ଉପରେ କ significant ଣସି ପ୍ରଭାବ ପଡି ନଥିଲା | G. duodenalis cyst ଗ୍ରୁପ୍ (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine ଏବଂ pcDNA3 ରେ IL-β ସିକ୍ରେସନ୍ ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା |1- ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ର ଇଣ୍ଟ୍ରାମୁସ୍କୁଲାର୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍ ସେରମ୍ IL-1β ସ୍ତରକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି କରିଛି (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P <0.0001);(iii) pcDNA3। ।MCC950 ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ଏବଂ MOCK ଗୋଷ୍ଠୀର ପ୍ରତ୍ୟେକ ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ତୁଳନା: ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) MCC950 କୁ ଅବରୋଧ କରିବା ପରେ |ଜି। , 58) = 3.540, P = 0.0120; pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.0447; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F (9, 58 ) = 3.540, P = 0.0164) |ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ସୂଚିତ କରେ ଯେ ଭିଭୋରେ ଆଲଫା-୨ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମର ସକ୍ରିୟତାକୁ ମଧ୍ୟସ୍ଥ କରିଥାଏ |
pcDNA3.1 (+) - ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ସ ଭିଭୋରେ NLRP3 ହୋଷ୍ଟ ଇନଫ୍ଲାମାସୋମକୁ ସକ୍ରିୟ କରିଥାଏ |ମୂଷାମାନଙ୍କୁ ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଇଉକାରିଓଟିକ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ପ୍ଲାସିମ୍ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ କିମ୍ବା pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ସହିତ ପ୍ରତିରୋପଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପରେ MCC950 (ip; MCC950 ଗୋଷ୍ଠୀ) ସହିତ ଚିକିତ୍ସା କରାଯାଇଥିଲା | )ଏକ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ PBS କିମ୍ବା pcDNA3.1 (+) ପ୍ଲାସିମ୍ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା, ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ଏକ ସକରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀ ଏବଂ ଚିକିତ୍ସା ବ୍ୟବସ୍ଥା |b ମୂଷାମାନଙ୍କରେ IL-1β ର ସେରମ୍ ସ୍ତର 7 ଦିନରେ ELISA ଅନୁସନ୍ଧାନ ଦ୍ୱାରା ମାପ କରାଯାଇଥିଲା |ଏକପାଖିଆ ANOVA ବ୍ୟବହାର କରି MOCK ଗୋଷ୍ଠୀର ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ MOCK ଗୋଷ୍ଠୀ ଏବଂ MCC950 ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ SPSS ସଫ୍ଟୱେର୍ ସଂସ୍କରଣ 22.0 ର ଟି-ଟେଷ୍ଟ ବ୍ୟବହାର କରି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଆଷ୍ଟେରିସ୍କଗୁଡିକ MOCK ଗୋଷ୍ଠୀର ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ, * P <0.05 ଏବଂ *** P <0.001;ଡଲାର ଚିହ୍ନ ($) MOCK ଗୋଷ୍ଠୀର ପ୍ରତ୍ୟେକ ଗୋଷ୍ଠୀ ଏବଂ P <0.05 ରେ MCC950 ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ |ସାତଟି ସ୍ୱାଧୀନ ଜ bi ବିକ ପରୀକ୍ଷଣର ଫଳାଫଳ |i, ଇଣ୍ଟ୍ରାମୁସ୍କୁଲାର ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍, ns, ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ନୁହେଁ (P> 0.05)
ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସଂକ୍ରମଣ ଉପରେ NLRP3 ହୋଷ୍ଟ ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମର ଆଲଫା-୨ ଏବଂ ଆଲଫା -3। Gi ଜିଆର୍ଡାଇନ୍-ମଧ୍ୟସ୍ଥି ସକ୍ରିୟତାର ପ୍ରଭାବ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିବାକୁ, ଆମେ WT C57BL / 6 ମୂଷା ବ୍ୟବହାର କରି ଆଲଫା-୨ ଗିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ ଆଲଫା -3। Ar ଗିଆର୍ଡାଇନ୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଦେଇଥିଲୁ |ଜି।ପରୀକ୍ଷଣର ଏକ ବିସ୍ତୃତ ଯୋଜନା ଚିତ୍ର 5a ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି |ପ୍ରତ୍ୟେକ ମାଉସର ଶରୀରର ଓଜନ ପ୍ରତିଦିନ ମାପ କରାଯାଉଥିଲା, ଏକ ଗ୍ୟାଷ୍ଟ୍ରିକ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ପ୍ରଶାସନର 7 ଦିନ ପରେ ତାଜା ଡୁଏଡେନାଲ୍ ଟିସୁର ନମୁନା ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା, ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ ସଂଖ୍ୟା ମାପ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ହିଷ୍ଟୋପାଥୋଲୋଜିକାଲ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା |ଚିତ୍ର 5b ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି, ଖାଇବା ସମୟ ସହିତ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ଗୋଷ୍ଠୀର ମୂଷା BW ଧୀରେ ଧୀରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା |ଜି ଡୁଡୋଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟର ଇଣ୍ଟ୍ରାଗାଷ୍ଟ୍ରିକ୍ ପ୍ରଶାସନର ତୃତୀୟ ଦିନରେ ମୂଷାଙ୍କ MT ହ୍ରାସ ହେବାକୁ ଲାଗିଲା, ଏବଂ ପରେ ଧୀରେ ଧୀରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା |ଆଲଫା-୨ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ ଆଲଫା 7.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଇଣ୍ଟ୍ରାମୁସ୍କୁଲ୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍ ଦ୍ uc ାରା NLRP3 ଇନଫ୍ଲାମାସୋମ୍ର ସକ୍ରିୟତା ମୂଷାମାନଙ୍କରେ ଓଜନ ହ୍ରାସକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ମାତ୍ରାରେ ବ en ାଇଥାଏ (ଦିନ 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 1.399, P = 0 .9754 ଦିନ 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 1.399, P = 0.9987 Day 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.3172, P = 0.9979 ଦିନ 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.3172, P = 0.8409 ଦିନ 3: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F (; 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 ଦିନ 3: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.8222, P = 0.0083 ଦିନ 4: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA | , F (4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, ଦିନ 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.5620, P <0.0001, Day 5: pcDNA3.1-alpha - 2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍, ANOVA, F (4, 30) = 0.9728, P <0.0001 ଦିନ 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Day 6: pcDNA3 .1 - ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍, ANOVA, F (4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, ଦିନ 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;ଦିନ 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.5369, P <0.0001 Day 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.5369, P <0.0001)ଡୁଏଡେନମ୍ (ଚିତ୍ର 5c) ରେ ପରଜୀବୀ ଭାରର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା |ଚିକିତ୍ସା ହୋଇନଥିବା ସକରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏବଂ ଖାଲି pcDNA3.1 ଭେକ୍ଟର ସହିତ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଦିଆଯାଇଥିବା ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ, ଜି-ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ସ ସଂଖ୍ୟା α-2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ α-7,3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ (pcDNA3.1-alpha) ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଦିଆଯାଇଥିବା ଗୋଷ୍ଠୀରେ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ ପାଇଲା | -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍: ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P <0.0001) |ଏଥିସହ, ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଆଲଫା -3 (ମୂଷାମାନଙ୍କରେ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଆଲଫା -2 (ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P = 0.0081) ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ସୁରକ୍ଷିତ ଥିଲା |HE ଦାଗର ଫଳାଫଳ ଡିମ୍ବିରିରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି |5d - fଆଲଫା-୨ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡିନରେ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଦିଆଯାଇଥିବା ମୂଷାମାନଙ୍କରେ କମ୍ ଡୁଏଡେନାଲ୍ ଟିସୁ କ୍ଷତ ରହିଥିଲା, ଯାହା ଭିଲସ୍ କ୍ଷତି ଦ୍ manifest ାରା ପ୍ରଦର୍ଶିତ ହୋଇଥିଲା, ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଦିଆଯାଇଥିବା ମୂଷା ଏବଂ ଖାଲି pcDNA3 ଭେକ୍ଟର ସହିତ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଦିଆଯାଇଥିବା ମୂଷା ତୁଳନାରେ .1 ଜୁମ୍ |(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 2.466, P = 0.0035 କିମ୍ବା P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 2.466, P = 0.0028 କିମ୍ବା P = 0.0055) ଏବଂ କ୍ରିପ୍ଟ ଆଟ୍ରୋଫି (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 1.470, P = 0.0264 କିମ୍ବା P = 0.0158; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA , F (3, 24) = 1.470, P = 0.0371 କିମ୍ବା P = 0.0191) |ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ସୂଚିତ କରେ ଯେ ଭିଭୋରେ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମକୁ ସକ୍ରିୟ କରି ଆଲଫା-୨ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ ଆଲଫା -3,3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସର ସଂକ୍ରମଣକୁ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ |
PCDNA3.1 (+) ର ଭୂମିକା - ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସଂକ୍ରମଣରେ ଜିଆର୍ଡିନସ୍ |ମୂଷାମାନଙ୍କୁ ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଇଉକାରିଓଟିକ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ପ୍ଲାସିମିଡ୍ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ କିମ୍ବା pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ସହିତ ପ୍ରତିରୋପଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପରେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସିଷ୍ଟସ୍ (ig) ସହିତ ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜ କରାଯାଇଥିଲା |ପିବିଏସ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ଏବଂ pcDNA3.1 (+) + ଡୁଏଡେନାଲ୍ ସିଷ୍ଟ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ନକାରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ଡୁଏଡେନାଲ୍ ସିଷ୍ଟ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀ ସକରାତ୍ମକ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଗୋଷ୍ଠୀ ଏବଂ ଚିକିତ୍ସା ବ୍ୟବସ୍ଥା |b ବିଭିନ୍ନ ଚିକିତ୍ସା ଗୋଷ୍ଠୀର ମୂଷାଙ୍କ MT 7 ଦିନ ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜ ପରେ ନଜର ରଖାଯାଇଥିଲା |ଜି ଡୁଡୋଡେନାଲିସ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ଏବଂ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା-୨ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଗ୍ରୁପ୍, * P <0.05, ** P <0.01, ଏବଂ *** P <0.001;ଜି ଡୁଡୋଡେନାଲିସ୍ ଏବଂ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -3.3 ଜାର୍ଡିନ ଗୋଷ୍ଠୀ, $$ P <0.01 ଏବଂ $$$ P <0.001 ମଧ୍ୟରେ ଡଲାର ଚିହ୍ନ ($) ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ |c ଡୁଏଡେନମ୍ (cm ସେମି ଲମ୍ବ) ରୁ ml ୦ ମି.ଲି.ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସଂକ୍ରମଣ ଗୋଷ୍ଠୀ, pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଗ୍ରୁପ୍ ଏବଂ pcDNA3.1 (+) - ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ SPSS ସଫ୍ଟୱେର୍ ସଂସ୍କରଣ 22.0 ବ୍ୟବହାର କରି ଏକପାଖିଆ ANOVA ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଆଷ୍ଟେରିସ୍କ ** P <0.01 ଏବଂ *** P <0.001 ରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ |d ଦ୍ୱାଦଶରେ ହିଷ୍ଟୋପାଥୋଲୋଜିକାଲ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ |ଲାଲ୍ ତୀରଗୁଡ଼ିକ ଭିଲିର କ୍ଷତି ସୂଚାଇଥାଏ, ସବୁଜ ତୀରଗୁଡ଼ିକ କ୍ରିପ୍ଟଗୁଡିକର କ୍ଷତି ସୂଚାଇଥାଏ |ମାପ ଦଣ୍ଡ: 100 µ ମି।e, f ମାଉସ୍ ଡୁଏଡେନାଲ୍ ଭିଲସ୍ ଉଚ୍ଚତା (ଇ) ଏବଂ କ୍ରିପ୍ଟ ଉଚ୍ଚତା (f) ର ପରିସଂଖ୍ୟାନ ବିଶ୍ଳେଷଣ |ଚିତ୍ର 1d ରେ ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ SPSS ସଫ୍ଟୱେର୍ ସଂସ୍କରଣ 22.0 ବ୍ୟବହାର କରି ଏକପାଖିଆ ANOVA ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଆଷ୍ଟେରିସ୍କ * P <0.05 ଏବଂ ** P <0.01 ରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ |ସାତଟି ସ୍ୱାଧୀନ ଜ bi ବିକ ପରୀକ୍ଷଣର ଫଳାଫଳ |ns, ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ନୁହେଁ (P> 0.05)
ଜିଆର୍ଡିଆ ଡୁଏଡେନମ୍ ହେଉଛି ମଣିଷ ଏବଂ ଅନ୍ୟ ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କର ଏକ ଜଣାଶୁଣା ଅନ୍ତ est ସ୍ଥ ପରଜୀବୀ ଯାହା ଜିଆର୍ଡିଆସିସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରେ |2004 ରେ, ଏହା WHO ଅବହେଳିତ ରୋଗ ଅଭିଯାନରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ହୋଇଥିଲା 6 ବର୍ଷ ମଧ୍ୟରେ ଏହାର ଉଚ୍ଚତା ହେତୁ ବିଶେଷ ଭାବରେ ସ୍ୱଳ୍ପ ସାମାଜିକ ଅର୍ଥନ status ତିକ ସ୍ଥିତିର ସମ୍ପ୍ରଦାୟରେ [32] |ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସଂକ୍ରମଣର ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଜନ୍ମଗତ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରଣାଳୀ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରିଥାଏ |ମାଉସ୍ ମାକ୍ରୋଫେଜ୍ ଗୁଡିକ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ଜାଲ ଛାଡି ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ଙ୍କୁ ହତ୍ୟା କରି ହତ୍ୟା କରିଥିବା ଜଣାଯାଇଛି।ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍, ଏକ ଅଣ-ଆକ୍ରମଣକାରୀ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ପରଜାଇଟ୍, ହୋଷ୍ଟ ପ୍ରଦାହକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବା ପାଇଁ ମାଉସ୍ ମାକ୍ରୋଫେଜରେ p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, ଏବଂ NLRP3 ପ୍ରଦାହକାରୀ ସଙ୍କେତ ପଥକୁ ସକ୍ରିୟ କରିଥାଏ ଏବଂ ମୁକ୍ତ GEV ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ବ enhance ାଇପାରେ |13], 24] |ଅବଶ୍ୟ, GEV ରେ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ-ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ପ୍ରଦାହ ଏବଂ ଜିଆର୍ଡିଆସିସରେ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମର ଭୂମିକା ସହିତ ଜଡିତ ପ୍ରକୃତ PAMP ଗୁଡିକ ବର୍ଣ୍ଣିତ ହୋଇ ରହିଛି |ଏହି ଦୁଇଟି ପ୍ରଶ୍ନ ଉପରେ ଆଲୋକ ଦେବା ପାଇଁ, ଆମେ ଏହି ଅଧ୍ୟୟନ କରିଥିଲୁ |
NLRP3 ଇନଫ୍ଲାମାସୋମ ପ୍ରତିରକ୍ଷା କୋଷର ସାଇଟୋପ୍ଲାଜରେ ଅବସ୍ଥିତ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ କଣିକା ଯଥା ୟୁରିକ୍ ଏସିଡ୍ ସ୍ଫଟିକ୍, ବିଷାକ୍ତ ପଦାର୍ଥ, ଜୀବାଣୁ, ଜୀବାଣୁ ଏବଂ ପରଜୀବୀ ଦ୍ୱାରା ସକ୍ରିୟ ହୋଇପାରିବ |ଜୀବାଣୁ ଅଧ୍ୟୟନରେ, ବିଷାକ୍ତ ପଦାର୍ଥଗୁଡିକ ମୁଖ୍ୟ PAMP ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଛି ଯାହା ପ୍ରଦାହକାରୀ ସେନ୍ସରକୁ ସକ୍ରିୟ କରିଥାଏ, ଯାହା ଦ୍ inflam ାରା ପ୍ରଦାହ ଏବଂ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁ ଘଟିଥାଏ [34]।କେତେକ ଗଠନମୂଳକ ବିବିଧ ବିଷାକ୍ତ ପଦାର୍ଥ ଯେପରିକି ଷ୍ଟାଫିଲୋକୋକସ୍ ଆରିଅସ୍ ଠାରୁ ହେମୋଲାଇସିନ୍ [35] ଏବଂ ଏଚେରିଚିଆ କୋଲି [36], ଏଣ୍ଟେରୋଟକ୍ସିନ (NHE) ରୁ ହେମୋଲାଇସିନ୍ BL (HBL) NLRP3 ପ୍ରଦାହକୁ ସକ୍ରିୟ କରିଥାଏ |ଭାଇରାଲ୍ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ SARS-COV-2 ଏନଭଲପ୍ (ଇ) ପ୍ରୋଟିନ୍ [38] ଏବଂ ଜିକା ଭାଇରସ୍ NS5 ପ୍ରୋଟିନ୍ [39] ପରି ଭାଇରାଲ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ NLRP3 ରିସେପ୍ଟର ଦ୍ୱାରା ସ୍ୱୀକୃତିପ୍ରାପ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ PAMP ଅଟେ |ପରଜୀବୀ ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଅନେକ ପରଜୀବୀ ହୋଷ୍ଟ ଇନଫ୍ଲାମାସୋମ ଆକ୍ଟିଭେସନ୍ ସହିତ ଜଡିତ ଥିବା ଜଣାଯାଇଛି, ଯେପରିକି ଟକ୍ସୋପ୍ଲାସ୍ମା ଗୋଣ୍ଡାଇ, ଟ୍ରାଇକୋମାନାସ୍ ଭେଜିନାଲିସ୍ [40], ଟ୍ରିପାନୋସୋମା କ୍ରୁଜି [41], ଏବଂ ଲିଶମାନିଆ [42] |ଟକ୍ସୋପ୍ଲାସ୍ମା ଗୋଣ୍ଡାଇର କୁମାରୀତା ସହିତ ଜଡିତ ଘନ ଗ୍ରାନୁଲ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ GRA35, GRA42, ଏବଂ GRA43, ଲୁଇସ୍ ରେଟ୍ ମାକ୍ରୋଫେଜରେ ପିରୋପଟୋସିସ୍ ସଂକ୍ରମଣ ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ |ଏଥିସହ, କେତେକ ଲିଶମାନିଆ ଅଧ୍ୟୟନରେ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ସହିତ ଜଡିତ ବ୍ୟକ୍ତିଗତ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକ ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦିଆଯାଇଛି, ଯେପରିକି ପରଜାଇଟ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ଲିପୋଫୋସଫୋଗ୍ଲାଇକାନ୍ [44] କିମ୍ବା ଜିଙ୍କ ମେଟାଲୋପ୍ରୋଟେଜ୍ [45] |ଜିନ୍ସର ଆନେକ୍ସିନ୍ ପରି ଆଲଫା-ଜିଆର୍ଡିନ ପରିବାର ମଧ୍ୟରେ, ଆଲଫା -1 ଜିଆର୍ଡିନ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଟିକା ପ୍ରାର୍ଥୀ ଭାବରେ ମାଉସ୍ ମଡେଲରେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ବିରୁଦ୍ଧରେ ସୁରକ୍ଷା ପ୍ରଦାନ କରୁଥିବା ଦର୍ଶାଯାଇଛି |ଆମର ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ G. duodenalis virulence factors alpha-2 ଏବଂ alpha-7,3 giardines କୁ ବାଛିଛୁ, ଯାହା ଜିଆର୍ଡିଆ ପାଇଁ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର କିନ୍ତୁ ଅପେକ୍ଷାକୃତ କମ୍ ରିପୋର୍ଟ ହୋଇଛି |ପ୍ରଦାହ ସକ୍ରିୟତାର ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଏହି ଦୁଇଟି ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ pcDNA3.1 (+) ଇଉକାରିଓଟିକ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ସିଷ୍ଟମ୍ ଭେକ୍ଟରରେ କ୍ଲୋନ କରାଯାଇଥିଲା |
ଆମର ମାଉସ୍ ମଡେଲରେ, ଖଣ୍ଡ ଖଣ୍ଡ କାସପେଜ୍ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରଦାହକ ସକ୍ରିୟତାର ମାର୍କର ଭାବରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ |ଉତ୍ତେଜନା ପରେ, NLRP3 ASC ସହିତ ଯୋଗାଯୋଗ କରେ, ପ୍ରୋସେସ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରେ, ଏବଂ ସକ୍ରିୟ କାସପେସ୍ ସୃଷ୍ଟି କରେ ଯାହା ପ୍ରୋ- IL-1β ଏବଂ ପ୍ରୋ- IL-18 କୁ ଯଥାକ୍ରମେ ପରିପକ୍ୱ IL-1β ଏବଂ IL-18 ରେ ପରିଣତ କରେ |ଇନଫ୍ଲାମେଟୋରୀ କାସପେସ୍ (କାସପେଜ୍ -1, -4, -5 ଏବଂ -11) ହେଉଛି ସିଷ୍ଟାଇନ୍ ପ୍ରୋଟିସର ଏକ ସଂରକ୍ଷିତ ପରିବାର ଯାହା ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ and ପୂର୍ଣ ଏବଂ ପ୍ରଦାହ ଏବଂ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ ହୋଇଥିବା କୋଷ ମୃତ୍ୟୁରେ ଜଡିତ |କାସପେଜ୍ -1 କାନୋନିକାଲ୍ ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ଦ୍ activ ାରା ସକ୍ରିୟ ହୋଇଥିବାବେଳେ କାସପେସ୍ -4, -5, ଏବଂ -11 ଆଟିପିକାଲ୍ ଇନଫ୍ଲାମାସୋମ ଗଠନ ସମୟରେ ଖଣ୍ଡ ଖଣ୍ଡ ହୋଇଯାଏ |ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ ଏକ ମଡେଲ୍ ଭାବରେ ମାଉସ୍ ପେରିଟୋନିଆଲ୍ ମାକ୍ରୋଫେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ ଏବଂ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସଂକ୍ରମଣର ଅଧ୍ୟୟନରେ ହୋଷ୍ଟ NLRP3 ପ୍ରଦାହ ସକ୍ରିୟତାର ମାର୍କ ଭାବରେ p20 କାସପେଜ୍ -1 ଖଣ୍ଡିତ କାସପେଜ୍ -1 ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ |ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ଦର୍ଶାଇଲା ଯେ ପ୍ରଦାହର ସାଧାରଣ ସକ୍ରିୟତା ପାଇଁ ଅନେକ ଆଲଫା-ଜିଆର୍ଡିନ ଦାୟୀ, ଯାହା ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ଏବଂ ଜୀବାଣୁ ସହିତ ଜଡିତ ପ୍ରମୁଖ ଭୂତାଣୁ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ଆବିଷ୍କାର ସହିତ ସମାନ ଅଟେ |ତଥାପି, ଆମର ଅଧ୍ୟୟନ କେବଳ ଏକ ପ୍ରାଥମିକ ପରଦା ଏବଂ ସେଠାରେ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଅଣୁ ଅଛି ଯାହା ଅଣ-ଶାସ୍ତ୍ରୀୟ ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମକୁ ସକ୍ରିୟ କରିପାରିବ, କାରଣ ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନରେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ସଂକ୍ରମଣରେ ଉଭୟ ଶାସ୍ତ୍ରୀୟ ଏବଂ ଅଣ-ଶାସ୍ତ୍ରୀୟ ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ମିଳିଥିଲା ​​|ଉତ୍ପାଦିତ p20 କାସପେଜ୍ -1 NLRP3 ଇନଫ୍ଲାମାସୋମ ସହିତ ଜଡିତ କି ନାହିଁ ତାହା ସ୍ଥିର କରିବାକୁ, ଆମେ ଆଲଫା -2 ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡିନକୁ ମାଉସ ପେରିଟୋନିଆଲ ମାକ୍ରୋଫେଜରେ ଟ୍ରାନ୍ସଫେକ୍ଟ କରି ମୂଖ୍ୟ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରୋଟିନ୍ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତର ଏବଂ ASC ଅଲିଗୋମେରାଇଜେସନ୍ ସ୍ତର ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରି ଉଭୟ α- ଗିଆର୍ଡିନ ସକ୍ରିୟ ଥିବା ନିଶ୍ଚିତ କରୁ | ପ୍ରଦାହକାରୀ NLRP3 |ଆମର ଫଳାଫଳ ମାନକୋ-ପ୍ରାଇକୋଡା ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନଙ୍କ ତୁଳନାରେ ସାମାନ୍ୟ ଭିନ୍ନ, ଯିଏ ରିପୋର୍ଟ କରିଛନ୍ତି ଯେ ଜି ମୁରିସ୍ କିମ୍ବା ଇ.କୋଲି EPEC ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ସହିତ କାକୋ-୨ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଉତ୍ତେଜନା NLRP3, ASC, ଏବଂ କାସପେଜ୍ -1 ର ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ତୀବ୍ରତାକୁ ବ increase ାଇପାରେ | ଯଦିଓ ଗୁରୁତ୍ not ପୂର୍ଣ ନୁହେଁ, ଯେତେବେଳେ କି ଜି ମୁରିସ୍ ଏବଂ ଇ କୋଲିର ମୂଲ୍ୟବୋଧ ତିନୋଟି ପ୍ରୋଟିନର ସ୍ତରକୁ ବ increased ାଇଲା |ଏହି ଅସଙ୍ଗତି ଜିଆର୍ଡିଆ ପ୍ରଜାତି, କୋଷ ରେଖା ଏବଂ ପ୍ରାଥମିକ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଚୟନରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ ହେତୁ ହୋଇପାରେ |ଆମେ 5 ସପ୍ତାହ ବୟସ୍କା ମହିଳା WT C57BL / 6 ମୂଷାରେ MCC950 ବ୍ୟବହାର କରି ଭିଭୋ ଆସେସରେ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲୁ, ଯାହା ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ପାଇଁ ଅଧିକ ସଂକ୍ରମିତ |MCC950 ହେଉଛି ଏକ ଶକ୍ତିଶାଳୀ ଏବଂ ଚୟନକାରୀ ଛୋଟ ଅଣୁ NLRP3 ପ୍ରତିବନ୍ଧକ ଯାହାକି ନାନୋମୋଲାର୍ ଏକାଗ୍ରତାରେ କାନୋନିକାଲ୍ ଏବଂ ଅଣ-କାନୋନିକାଲ୍ NLRP3 ସକ୍ରିୟତାକୁ ଅବରୋଧ କରିଥାଏ |MCC950 NLRP3 ଆକ୍ଟିଭେସନ୍ କୁ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ କରେ କିନ୍ତୁ AIM2, NLRC4, ଏବଂ NLRP1 ପ୍ରଦାହକାରୀ ପଥ କିମ୍ବା TLR ସିଗନାଲ୍ ପଥଗୁଡିକର ସକ୍ରିୟତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ ନାହିଁ |MCC950 NLRP3 ସକ୍ରିୟତାକୁ ଅବରୋଧ କରେ କିନ୍ତୁ NLRP3 ଆରମ୍ଭ, K + efflux, Ca2 + ପ୍ରବାହ, କିମ୍ବା NLRP3 ଏବଂ ASC ମଧ୍ୟରେ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାକୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରେ ନାହିଁ |ଏହା ପରିବର୍ତ୍ତେ, ଏହା ASC ଅଲିଗୋମେରାଇଜେସନ୍ ଅବରୋଧ କରି NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ସକ୍ରିୟତାକୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରିଥାଏ |ତେଣୁ, ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ୍ ପରେ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମର ଭୂମିକା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଆମେ ଏକ ଭିଭୋ ଅଧ୍ୟୟନରେ MCC950 ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ |ସକ୍ରିୟ କାସପେଜ୍ -1 p10 ପ୍ରୋ-ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମେଟୋରୀ ସାଇଟୋକାଇନ୍ସ ପ୍ରୋ- IL-1β ଏବଂ ପ୍ରୋ- IL-18 କୁ ପରିପକ୍ୱ IL-1β ଏବଂ IL-18 ରେ ପରିଣତ କରେ |ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, MCC950 ସହିତ କିମ୍ବା ବିନା ଜିଆର୍ଡାଇନ୍-ଚିକିତ୍ସିତ ମୂଷାମାନଙ୍କରେ ସେରମ୍ IL-1β ସ୍ତରଗୁଡିକ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ସକ୍ରିୟ ହୋଇଛି କି ନାହିଁ ସୂଚକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ଆଶା କରାଯାଉଥିବା ପରି, MCC950 ଚିକିତ୍ସା ସେରମ୍ IL-1β ସ୍ତରକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା ​​|ଏହି ତଥ୍ୟଗୁଡିକ ସ୍ପଷ୍ଟ ଭାବରେ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ଜିଆର୍ଡିନ ଆଲଫା-୨ ଏବଂ ଜିଆର୍ଡିନ ଆଲଫା -3.3 NLRP3 ମାଉସ ଇନଫ୍ଲାସୋମକୁ ସକ୍ରିୟ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ ଅଟନ୍ତି |
ବିଗତ ଏକ ଦଶନ୍ଧି ମଧ୍ୟରେ ଜମା ହୋଇଥିବା ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ତଥ୍ୟ ପ୍ରମାଣିତ କରିଛି ଯେ IL-17A ହେଉଛି ଜି ମୁରିସ୍ ବିରୁଦ୍ଧରେ ପ୍ରତିରୋଧକ ଶକ୍ତି, IL-17RA ସଙ୍କେତ ଦେବା, ଆଣ୍ଟିମିକ୍ରୋବିଆଲ୍ ପେେପାଇଡ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରିବା ଏବଂ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟ ଆକ୍ଟିଭେସନ୍ [51] |ଅବଶ୍ୟ, ଯୁବକମାନଙ୍କଠାରେ ଜିଆର୍ଡିଆ ସଂକ୍ରମଣ ବାରମ୍ବାର ଦେଖାଯାଏ, ଏବଂ ରିପୋର୍ଟ ହୋଇଛି ଯେ ଯୁବ ମୂଷାମାନଙ୍କରେ ଜିଆର୍ଡିଆ ସଂକ୍ରମଣ ଏହାର ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରଭାବ ପ୍ରୟୋଗ କରିବା ପାଇଁ IL-17A ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ସକ୍ରିୟ କରେ ନାହିଁ, ଯାହା ଦ୍ researchers ାରା ଅନୁସନ୍ଧାନକାରୀମାନେ ଅନ୍ୟ ଇମ୍ୟୁନୋମୋଡ୍ୟୁଲେଟାରୀ ଜିଆର୍ଡିଆ ଖୋଜିବାକୁ ଉତ୍ସାହିତ କରନ୍ତି।ହେଲମିନଥ ସଂକ୍ରମଣର ଯନ୍ତ୍ରକ .ଶଳ |ନିକଟରେ ହୋଇଥିବା ଏକ ଅଧ୍ୟୟନର ଲେଖକମାନେ ରିପୋର୍ଟ କରିଛନ୍ତି ଯେ ଜି ମୁରିସ୍ ଇ.କୋଲି EPEC ଦ୍ N ାରା NLRP3 ଇନଫ୍ଲାମାସୋମକୁ ସକ୍ରିୟ କରିପାରିବେ, ଯାହା ଆଣ୍ଟିମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ଉତ୍ପାଦନକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିଥାଏ ଏବଂ ଏହାର ସଂଲଗ୍ନ କ୍ଷମତା ଏବଂ ଅନ୍ତ est ସ୍ଥଳୀରେ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ ସଂଖ୍ୟା ହ୍ରାସ କରିଥାଏ, ଯାହା ଦ୍ col ାରା କୋଲନ୍ ର ଗମ୍ଭୀରତା କମିଯାଏ | ବାସିଲି ଦ୍ caused ାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ରୋଗଗୁଡିକ |ବିଭିନ୍ନ ରୋଗର ବିକାଶରେ NLRP3 ଇନଫ୍ଲାସୋମ ଜଡିତ |ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ସିସୋଡୋମାନାସ୍ ଏରୁଗିନୋସା କୋଷ ମୃତ୍ୟୁକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ମାକ୍ରୋଫେଜରେ ଅଟୋଫାଗି ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ ଏବଂ ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟା NLRP3 ଇନଫ୍ଲାମାସୋମ୍ର ସକ୍ରିୟତା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ |N. caninum ପାଇଁ, NLRP3 ଇନଫ୍ଲାମାସୋମର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଶୀଳ ଅମ୍ଳଜାନ ପ୍ରଜାତି-ମଧ୍ୟସ୍ଥି ସକ୍ରିୟତା ହୋଷ୍ଟରେ ଏହାର ନକଲକୁ ସୀମିତ କରି ଏହାକୁ ଏକ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଚିକିତ୍ସା ଲକ୍ଷ୍ୟରେ ପରିଣତ କରେ |ପାରାକୋସିଡିଓଏଡସ୍ ବ୍ରାସିଲିଏନ୍ସିସ୍ ମାଉସ୍ ହାଡର ମର୍ମରୁ ଉତ୍ପନ୍ନ ଡେଣ୍ଡ୍ରାଇଟିସ୍ କୋଷରେ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ୍ର ସକ୍ରିୟତାକୁ ପ୍ରବର୍ତ୍ତାଇବା ପାଇଁ ମିଳିଥିଲା, ଫଳସ୍ୱରୂପ ପ୍ରଦାହକାରୀ ସାଇଟୋକାଇନ୍ IL-1β ମୁକ୍ତ ହୋଇଥିଲା, ଯାହା ହୋଷ୍ଟ ପ୍ରତିରକ୍ଷା କ୍ଷେତ୍ରରେ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରିଥାଏ |ଅନେକ ଲାଇସମାନିଆ ପ୍ରଜାତି, ଯେପରିକି L. amazonensis, L. major, L. braziliensis, ଏବଂ L. infantum chagasi, ମାକ୍ରୋଫେଜରେ NLRP3 ଏବଂ ASC- ନିର୍ଭରଶୀଳ କାସପେଜ୍ -1 କୁ ସକ୍ରିୟ କରିଥାଏ, ଏବଂ ଲିଶମାନିଆ ସଂକ୍ରମଣ ମଧ୍ୟ କରିଥାଏ |NLRP3 / ASC / caspase-1 ଜିନ୍ [11] ରେ ମୂଷା ଅଭାବରେ ପରଜୀବୀ ନକଲକୁ ବୃଦ୍ଧି କରାଯାଇଥାଏ |ଜାମ୍ବୋନି ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନେ |ଲିସମାନିଆ ସଂକ୍ରମଣ ମାକ୍ରୋଫେଜରେ NLRP3 ଇନଫ୍ଲାମାସୋମର ସକ୍ରିୟତା ସୃଷ୍ଟି କରିବାକୁ ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି, ଯାହା ଇଣ୍ଟ୍ରାସେଲୁଲାର ପରଜାଇଟ୍ ନକଲକୁ ସୀମିତ କରିଥାଏ |ଏହିପରି, ଲିଶମାନିଆ NLRP3 ସକ୍ରିୟତାକୁ ଏକ ଏଡାନ୍ସ ରଣନୀତି ଭାବରେ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ କରିପାରେ |ଭିଭୋ ଅଧ୍ୟୟନରେ, NLRP3 ଇନଫ୍ଲାମାସୋମ ଲିଶମାନିଆ ବିଲୋପ କରିବାରେ ସହାୟକ ହୋଇଥିଲା, କିନ୍ତୁ ଟିସୁ ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଲା ନାହିଁ |ଅପରପକ୍ଷେ, ହେଲମିନଥିଆସିସ୍ ଅଧ୍ୟୟନରେ, NLRP3 ଇନଫ୍ଲାମାସୋମର ସକ୍ରିୟତା ପେଟର ପାକସ୍ଥଳୀ ହେଲମିନଥିଆସିସ୍ ବିରୁଦ୍ଧରେ ହୋଷ୍ଟର ପ୍ରତିରକ୍ଷା ପ୍ରତିରୋଧକ ଶକ୍ତିକୁ ଦମନ କରିଥିଲା ​​|ସାରା ବିଶ୍ୱରେ ଡାଇରିଆ ସୃଷ୍ଟି କରୁଥିବା ମୁଖ୍ୟ ଜୀବାଣୁ ମଧ୍ୟରୁ ଶିଗେଲା ଅନ୍ୟତମ |ଏହି ଜୀବାଣୁ P2X7 ରିସେପ୍ଟର-ମଧ୍ୟସ୍ଥ କେ + ଇଫ୍ଲକ୍ସ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟାଶୀଳ ଅମ୍ଳଜାନ ପ୍ରଜାତି, ଲାଇସୋସୋମାଲ୍ ଏସିଡିଫିକେସନ୍ ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ କ୍ଷତି ମାଧ୍ୟମରେ IL-1β ଉତ୍ପାଦନକୁ ପ୍ରବର୍ତ୍ତାଇପାରେ |NLRP3 ଇନଫ୍ଲାମାସୋମ ଶିଗେଲା ବିରୁଦ୍ଧରେ ଫାଗୋସାଇଟିସ ଏବଂ ମାକ୍ରୋଫେଜ୍ ର ଜୀବାଣୁ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ନକାରାତ୍ମକ ଭାବରେ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିଥାଏ |ପ୍ଲାଜାମୋଡିୟମ୍ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ପ୍ଲାଜାମୋଡିୟମ୍ ଦ୍ infected ାରା ସଂକ୍ରମିତ AIM2, NLRP3 କିମ୍ବା କ୍ୟାସପେଜ୍ -1 ଅଭାବୀ ମୂଷା ଉଚ୍ଚ ସ୍ତରର ଟାଇପ୍ ଇଣ୍ଟରଫେରନ୍ ଉତ୍ପାଦନ କରନ୍ତି ଏବଂ ପ୍ଲାଜାମୋଡିୟମ୍ ସଂକ୍ରମଣକୁ ଅଧିକ ପ୍ରତିରୋଧ କରନ୍ତି |ଅବଶ୍ୟ, ମୂଷାମାନଙ୍କରେ NLRP3 ପ୍ରଦାହର ପାଥୋଜେନିକ୍ ଆକ୍ଟିଭେସନ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିବାରେ ଆଲଫା -2 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ର ଭୂମିକା ଅସ୍ପଷ୍ଟ |
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, MCC950 ଦ୍ N ାରା NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ୍ର ପ୍ରତିବନ୍ଧକ BW କୁ ହ୍ରାସ କଲା ଏବଂ ମୂଷାମାନଙ୍କ ଅନ୍ତ est ସ୍ଥ ଲାଭେଜ୍ ଫ୍ଲୁଇଡରେ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ ସଂଖ୍ୟା ବ increased ାଇଲା, ଫଳସ୍ୱରୂପ ଡୁଏଡେନାଲ୍ ଟିସୁରେ ଅଧିକ ଗୁରୁତର ପରିବର୍ତ୍ତନ ଘଟିଲା |ଆଲଫା-୨ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ହୋଷ୍ଟ ମାଉସ୍ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମକୁ ସକ୍ରିୟ କରିଥାଏ, ମାଉସ୍ ଶରୀରର ଓଜନ ବ increase ାଇଥାଏ, ଅନ୍ତ est ସ୍ଥ ଲାଭେଜ୍ ଫ୍ଲୁଇଡରେ ଟ୍ରଫୋଜାଇଟ୍ ସଂଖ୍ୟା ହ୍ରାସ କରିଥାଏ ଏବଂ ପାଥୋଲୋଜିକାଲ୍ ଡୁଏଡେନାଲ୍ କ୍ଷତକୁ ଦୂର କରିଥାଏ |ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ସୂଚିତ କରେ ଯେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସ୍ ଆଲଫା-୨ ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ଏବଂ ଆଲଫା -3,3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ ମାଧ୍ୟମରେ NLRP3 ହୋଷ୍ଟ ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମକୁ ସକ୍ରିୟ କରିପାରନ୍ତି, ଯାହା ମୂଷାମାନଙ୍କରେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସର ରୋଗକୁ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ |
ସାମୂହିକ ଭାବରେ, ଆମର ଫଳାଫଳ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ଆଲଫା -2 ଏବଂ ଆଲଫା -3.3 ଜିଆର୍ଡାଇନ୍ସ NLRP3 ହୋଷ୍ଟ ଇନଫ୍ଲାମାସୋମର ସକ୍ରିୟତାକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିଥାଏ ଏବଂ ମୂଷାମାନଙ୍କରେ ଜି ଡୁଏଡେନାଲିସର ସଂକ୍ରମଣକୁ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ |ତେଣୁ, ଏହି ଅଣୁଗୁଡ଼ିକ ଜିଆର୍ଡିଆସିସ୍ ରୋକିବା ପାଇଁ ଲକ୍ଷ୍ୟ ରଖିଛନ୍ତି |
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
ଲିଆଙ୍ଗ AKS, Liang AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM |ଜିଆର୍ଡିଆସିସ୍: ଏକ ସମୀକ୍ଷାନିକଟରେ ପ୍ରକାଶ ପାଇଥିଲା ଯେ ପ୍ୟାଟ୍ ଇନଫ୍ଲାମ drugs ଷଧ ପ୍ରତି ଆଲର୍ଜି ଅଟେ।2019; 13: 134–43
ଏସ୍କୋବେଡୋ ଏଏ, ସିମରମାନ୍ ଏସ୍ ଜିଆର୍ଡିଆସିସ୍: ଫାର୍ମାକୋଥେରାପିର ସମୀକ୍ଷା |ଜଣେ ଫାର୍ମାସିଷ୍ଟଙ୍କ ବିଶେଷଜ୍ଞ ମତ |2007;8: 1885–902
ତିଆନ୍ ହୁଫେଙ୍ଗ୍, ଚେନ୍ ବିନ୍, ୱେନ ଜିଆନଫେଙ୍ଗ |ଜିଆର୍ଡିଆସିସ୍, ଡ୍ରଗ୍ ପ୍ରତିରୋଧ ଏବଂ ନୂତନ ଲକ୍ଷ୍ୟର ଆବିଷ୍କାର |ଡ୍ରଗ୍ ଟାର୍ଗେଟକୁ ବିକୃତ କରେ |2010; 10: 295-302
ୱାଙ୍ଗ ଜେ, ୱାଙ୍ଗ ଏକ୍ସ, ଜିଆଓ ୟି, ୱାଙ୍ଗ ଡବ୍ଲୁ, ୱୁ ଏକ୍ସ, କିନ୍ ଟି ଇତ୍ୟାଦି NLRP3 ପ୍ରଦାହଜନକ ଏବଂ ପ୍ରଦାହଜନକ ରୋଗ |ଅକ୍ସାଇଡ୍ ମେଡ୍ ସେଲ୍ ଲଙ୍ଗେଭ୍ |2020; 2020: 4063562
ଚେନ୍ GY, Núñez G. ଅନ୍ତନଳୀ ପ୍ରଦାହ ଏବଂ କର୍କଟରେ ପ୍ରଦାହର ଭୂମିକା |ଗ୍ୟାଷ୍ଟ୍ରୋଏଣ୍ଟେରୋଲୋଜି |2011;141: 1986–99
ପ୍ରତିରକ୍ଷା ସହନଶୀଳତା ଏବଂ ଅନ୍ତନଳୀ ପ୍ରଦାହର ଛକଠାରେ ପେଲେଗ୍ରିନି ସି, ଆଣ୍ଟୋନିଓଲି ଏଲ୍, ଲୋପେଜ୍-କାଷ୍ଟେଜନ୍ ଜି, ବ୍ଲାଣ୍ଡିଜି ସି, ଫୋରନା ଏମ୍ କାନୋନିକାଲ୍ ଏବଂ ଆଟିପିକାଲ୍ NLRP3 ଇନ୍‌ଫ୍ଲାମାସୋମ ଆକ୍ଟିଭେସନ୍ |ପୂର୍ବ-ପ୍ରତିରୋଧକ |2017; 8: 36
ଲି ଏଲ୍, ୱାଙ୍ଗ ଏକ୍ସସି, ଗଙ୍ଗ ପିଟି, Zhang ାଙ୍ଗ ଏନ, Zhang ାଙ୍ଗ ଏକ୍ସ, ଲି ଏସ୍, ଇତ୍ୟାଦି |N. କାନିନମ୍ ସଂକ୍ରମଣର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ROS- ମଧ୍ୟସ୍ଥ NLRP3 ଇନଫ୍ଲାସୋମ ଆକ୍ଟିଭେସନ୍ ଜଡିତ |ପରଜୀବୀ ଭେକ୍ଟର |2020; 13: 449